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关键词：
微生物,发酵,秸秆,水解液,混菌发酵,乙醇
发表时间：
2013-03-29 08:31:46
嗜碱耐盐芽孢杆菌乙醛脱氢酶基因aldC的克隆及组氨酸融合酶蛋白的表达
谢浩东 | -> | 797| 1| 0.477071MB |微生物,嗜碱耐盐芽孢杆菌XJU-1,乙醛脱氢,酶基因重组,组氨酸标签,酶蛋白
摘要： 应用PCR 扩增嗜碱耐盐芽孢杆菌乙醛脱氢酶基因aldC，重组至原核表达载体pET30b(+)，转化大肠杆菌BL21(DE3)，诱导表达的重组乙醛脱氢酶在碳端含有一个组氨酸标签。SDS-PAGE 考察蛋白的表达量和亚基分子量，并对Km 值进行了考察。成功构建了pET30b-aldC 原核表达质粒；诱导表达了亚基分子量约为56 kDa 的组氨酸融合蛋白；乙醛脱氢酶活性比对照菌增加了约3.5 倍；Km 值为2.874 mmol/L。成功克隆并诱导表达了含组氨酸标签的嗜碱耐盐芽孢杆菌乙醛脱氢酶基因aldC。
乙醛是饮酒后乙醇在体内的初级代谢产物， 而后会在乙醛脱氢酶的参与下生成次级代谢产物乙酸。50 %的亚洲人缺乏有活性的ALDH[1]，造成乙醛的累积而引起一系列健康问题[2]。ALDH 可促进乙醛的代谢，降低饮酒对身体的危害。ALDH 无论是从动物肝脏还是微生物中提取，都面临着产量、成本高的难题。因此，本课题利用大肠杆菌表达系统对嗜碱耐盐芽孢杆菌XJU-1 aldC 基因的组氨酸融合蛋白进行表达和初步研究， 以求找到解决问题的关键所在。
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