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甲苯胺蓝荧光猝灭法测定核酸

吴倩 | -> | 1145| 0| 0.172376MB |核酸,甲苯胺蓝,荧光探针

吴倩 吴倩 | 文档量 |浏览量31064

摘􀀁 要􀀁 以甲苯胺蓝为荧光探针, 基于DNA 对甲苯胺蓝的荧光猝灭作用, 建立了一种定量测定DNA 的新方法。在pH 8􀀁5 的Tris􀀂HCl 缓冲溶液中, 测定小牛胸腺DNA 的线性范围为0􀀁1~ 6􀀁0 􀀁g􀀂mL- 1 , 检测限为27 ngmL- 1 。该方法应用于实际样品樟树嫩叶中的DNA 含量的测定, 获得了满意结果。
    核酸作为重要的遗传物质, 其研究内容是化学、生物等诸多学科中最为活跃的领域之一, 而核酸的定量测定是研究核酸的基础。测定核酸的方法主要是紫外􀀂可见分光光度法、荧光法、共振散射法等。荧光光谱法具有选择性好和灵敏度高的优点, 日益成为研究核酸等生物大分子的重要手段。但是由于核酸自身的荧光很弱, 利用内源荧光无法进行定量测定或结构分析, 这就需要引入一种荧光分子或离子, 即利用外源荧光获得有用的信息。溴乙锭方法的提出受到人们的关
注, 但是由于溴乙锭的致癌性, 使它们的进一步应用受到了很大的限制, 人们开始寻找新的探针。迄今为止, 人们常用于核酸研究的荧光探针主要包括有机染料[ 1􀀂3] 、金属离子[4, 5] 、金属离子配合物[ 6􀀂9] 、能量转移体系[10] 、半导体纳米粒子[11] 等。
    甲苯胺蓝属于吩噻嗪类染料, 已用于共振散射法[12] 和分光光度法[ 13] 测定DNA, 而用甲苯胺蓝为荧光探针来测定核酸未见报道。本文研究了甲苯胺蓝( TB) 与核酸相互作用的荧光体系, 在pH 8􀀁5 Tris􀀂HCl 缓冲溶液中, 体系的荧光随着核酸的加入而被猝灭, 其猝灭的程度与DNA 的浓度在一定范围内有良好的线性关系。据此, 建立了一种操作简单、灵敏度高, 干扰少的测定核酸的荧光分析体系。已用于实际样品樟树嫩叶中的DNA 含量的测定, 结果满意。
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