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关键词：
大曲,质量标准体系,生化指标,理化指标,感官指标,权重
发表时间：
2012-12-13 15:57:51
摘要: 本文旨在建立一种快速、高效的鉴别金钱白花蛇药材及其伪品的PCR 方法。通过对金钱白花蛇及其伪品的Cyt b 序列进行序列比对分析, 设计1 对能准确鉴别正品金钱白花蛇和其伪品的引物。采用商品化基因组DNA 提取试剂盒提取基因组总DNA, 采用两步循环PCR 程序进行PCR 鉴别, 并对影响PCR 结果的主要因素(退火温度、Taq 酶用量、循环次数等) 进行方法学考察和优化, 对不同公司PCR 仪、Taq 酶产品进行普适性试验。在方法学考察的基础上, 以试剂盒提取药材正品13 批、伪品20 批, 反应参数: 95 ℃预变性5 min, 循环反应30 次 (95 ℃ 30 s, 55 ℃ 45 s) , 72 ℃延伸5 min 的条件可使所有受检样品得到准确鉴定, 鉴别过程可在4 h 内完成,适合于金钱白花蛇PCR 鉴别方法的推广应用。
金钱白花蛇为眼镜蛇科动物银环蛇 (Bungarus multicinctus) 的幼蛇干燥体。气微腥, 味微咸。具有祛风、通络、止痉的功效。用于风湿顽痹、麻木拘挛、中风口眼歪斜、半身不遂、抽搐痉挛、破伤风、麻风、疥癣等[1]。
随着分子生药学的发展, 利用分子标记技术鉴别中药材已广泛应用。已建立的PCR 鉴别金钱白花
蛇的方法[2, 3], 从模板的提取、PCR 反应到最终凝胶成像分析, 单个样品的鉴定步骤繁琐, 耗时长。从鉴别方式上讲, 主要为序列比对, 难于推广。笔者采用高特异PCR 技术, 利用金钱白花蛇Cyt b 区域特定序列设计引物, 通过对模板提取过程、PCR 反应条件、试验稳定性及一系列方法学的考察, 在保证准确鉴定的基础上, 建立了一种更加快速、简便、有效的鉴别金钱白花蛇的新方法。
随着分子生药学的发展, 利用分子标记技术鉴别中药材已广泛应用。已建立的PCR 鉴别金钱白花
蛇的方法[2, 3], 从模板的提取、PCR 反应到最终凝胶成像分析, 单个样品的鉴定步骤繁琐, 耗时长。从鉴别方式上讲, 主要为序列比对, 难于推广。笔者采用高特异PCR 技术, 利用金钱白花蛇Cyt b 区域特定序列设计引物, 通过对模板提取过程、PCR 反应条件、试验稳定性及一系列方法学的考察, 在保证准确鉴定的基础上, 建立了一种更加快速、简便、有效的鉴别金钱白花蛇的新方法。
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