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关键词：
SSR,籼稻亲本,遗传多样性,聚类分析
发表时间：
2013-12-07 16:24:28
应用Tail_PCR扩增蓝猪耳T_DNA侧翼序列
安娜 | -> | 575| 0| 1217.722MB |蓝猪耳,TAIL-PCR,T-DNA,整合位点,侧翼序列
摘 要 蓝猪耳是一种重要的具有观赏和科研价值的花卉植物. 采用TAIL-PCR成功扩增了转基因蓝猪耳T-DNA插入位点的侧翼序列，扩增片断长度为200~2 000 bp，大多数片段在400 bp和800 bp左右，其中36%的序列含有植物的同源序列. 通过与GenBank数据库比对，确定了部分T-DNA插入位点周边序列编码的可能蛋白，并提交序列7条；另外还对T-DNA转化植物时整合的位点进行了分析，发现断裂位点集中在距右边界15~18 bp和右边界外234 bp处，分别占总扩增片段的47.62%和38.10%. 这为利用T-DNA标签进行蓝猪耳基因克隆和功能分析提供了实验技术上的保证. 图2 表2 参24
蓝猪耳是一种原产于热带和亚热带地区的一年生草本植物，由于花期长，花朵繁茂，特别适合作为花坛和地被植物用于夏季花卉的栽培. 此外，蓝猪耳再生容易，且具备特殊的裸露胚囊[1]，还是一种理想的植物细胞分化、花器官发育和授粉受精研究的模式植物[2,3]. 因此，蓝猪耳不仅在园艺生产中占有重要的地位，而且还具有很高的科研价值.
随着分子生物学技术的进一步发展，许多植物的基因序列已经测得[4~6]，但有关基因功能的了解却远远落后于此，因此基因功能的研究就成为一项艰巨而迫切的任务. 在植物的基因克隆和功能分析研究中，插入突变已经成为一种有效的识别基因并进行基因功能分析的工具[7~8]. 由于T-DNA转化具有高效、重复性好、简便易行和表达稳定等优点[9]，而且技术已经非常成熟，大多数植物都可以使用. 因此使用T-DNA作为插入突变源进行突变体的筛选并进行基因功能的研究在许多植物中应用并取得成功[10~11]. 当人们得到转基因植株后，如果要进行基因结构和功能的研究，就有必要对该植株外源基因插入位点的侧翼序列进行分析. 分析方法一般都基于PCR设计而成，有反向PCR法[12]和TAIL-PCR法[13]，其中TAIL-PCR法由于具有简便、高效而且准确的特点，在分析中被人们广泛应用[11]. 本研究采用TAIL-PCR对转基因蓝猪耳T-DNA插入位点侧翼序列进行扩增并通过与GenBank数据库比对，确定了部分T-DNA插入位点周边序列编码的可能蛋白，另外还总结了T-DNA转化植物时整合位点的规律. 这为利用T-DNA标签进行蓝猪耳基因克隆和功能分析建立了一个
系统，也为其他植物的研究提供了一个可以借鉴的方法.
随着分子生物学技术的进一步发展，许多植物的基因序列已经测得[4~6]，但有关基因功能的了解却远远落后于此，因此基因功能的研究就成为一项艰巨而迫切的任务. 在植物的基因克隆和功能分析研究中，插入突变已经成为一种有效的识别基因并进行基因功能分析的工具[7~8]. 由于T-DNA转化具有高效、重复性好、简便易行和表达稳定等优点[9]，而且技术已经非常成熟，大多数植物都可以使用. 因此使用T-DNA作为插入突变源进行突变体的筛选并进行基因功能的研究在许多植物中应用并取得成功[10~11]. 当人们得到转基因植株后，如果要进行基因结构和功能的研究，就有必要对该植株外源基因插入位点的侧翼序列进行分析. 分析方法一般都基于PCR设计而成，有反向PCR法[12]和TAIL-PCR法[13]，其中TAIL-PCR法由于具有简便、高效而且准确的特点，在分析中被人们广泛应用[11]. 本研究采用TAIL-PCR对转基因蓝猪耳T-DNA插入位点侧翼序列进行扩增并通过与GenBank数据库比对，确定了部分T-DNA插入位点周边序列编码的可能蛋白，另外还总结了T-DNA转化植物时整合位点的规律. 这为利用T-DNA标签进行蓝猪耳基因克隆和功能分析建立了一个
系统，也为其他植物的研究提供了一个可以借鉴的方法.
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