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生物胺高效液相色谱法测定条件的选择与优化

吕婷 | -> | 1834| 4| 0.615156MB |高效液相色谱,生物胺,条件优化

吕婷 吕婷 | 文档量 |浏览量9999

摘 要:利用反相高效液相色谱、荧光/ 二极管阵列检测器对8 种生物胺进行测定,通过对流动相选择、流动相梯度洗脱设定、检测器比较、检测波长比较及其他条件的探讨,得出高效液相色谱法测定生物胺的最佳色谱条件。结果确定,采用乙腈- 乙酸铵- 超纯水作为流动相经梯度洗脱,8 种生物胺在30min 内全部被分离出且峰形对称无拖尾和前伸现象。改进后的色谱条件可节约样品分析时间,荧光检测器的高选择性和灵敏性能够满足高精确度生物胺检测分析的要求。
    物胺是一类含氮的脂肪族、芳香族或杂环类有机化合物,通常分单胺和多胺两大类。其广泛存在于水产品、肉制品、乳制品、葡萄酒、啤酒、蔬菜、水果、坚果及巧克力等食品中。在人和动物机体细胞中,适当含量的生物胺( 组胺、色胺、精胺、尸胺等) 具有调节生长、增强代谢活力、控制血压和消除自由基等方面的作用[1]。而当机体摄入大量生物胺后,将产生一系列应激反应,引起头痛、呼吸紊乱、心悸、血压变化等不良症状,造成神经系统和心血管系统的损伤,
严重情况下,可引起大脑出血,甚至死亡[ 2 - 3 ]。Ask a r等[4]指出,当体内组胺量达到500mg/kg 时可对人体健康造成危害。还有研究指出,食品中组胺含量达到100~800mg/kg 的酪胺及30mg/kg 的2- 苯乙胺均可致毒[5]。动物机体内的二胺氧化酶及组胺转甲基酶都能够降解组胺,而腐胺和尸胺可抑制这两种酶的代谢作用从而增强组胺的毒性[6],并且这两种胺能够与亚硝酸盐反应产生亚硝胺,具有潜在的致癌性[ 7 -8 ]。因此,监控食品中的生物胺水平,控制食品中生物胺的形成,有助于提高和改善食品的质量和安全性。
    目前,生物胺的检测方法主要有高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)[9-11]、气相色谱法(gas chromatography,GC)[12]、离子色谱法(ionc h roma to g r a p h y ,IC) [ 1 3 ]、薄层色谱法( t h i n - l a y e r
chromatography,TLC)[14 ]、毛细管电泳法(capi llaryelectrophoresis,CE)[15]、酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)[16]等。其中,HPLC 具有分析速度快、柱效高、检测灵敏度高、定量分析准确的特点,是食品中生物胺含量分析测定的主要手段。但是,目前不同研究中采用HPLC 进行生物胺分析时,设定的色谱条件往往不相同。Marcobal 等[17]利用HPLC对西班牙红酒进行测定, 每个样品的分析时间为60min;Anli 等[18]的样品分析时间为40min,但是其流动相的准备较为复杂。为此,本实验从流动相选择、梯度洗脱设置、柱温、检测器选择、检测波长选择对色谱条件进行探讨和优化,确立同时测定8 种生物胺的最佳HPLC 色谱条件,以满足不同生物胺测定的要求。
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