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破碎酵母释放乙醛脱氢酶的研究

林可欣 | -> | 715| 0| 0.300207MB |微生物,酵母细胞,乙醛脱氢酶,破碎方法

林可欣 林可欣 | 文档量 |浏览量5397

摘要: 乙醛脱氢酶(ALDH)是一种胞内酶,在从酵母中分离提取ALDH 的过程中,破碎细胞是其中的关键步骤之一。本文着重考察了自溶、反复冻融、超声波和高压破碎仪的细胞破碎方法对释放ALDH 的影响。结果表明, 用高压破碎仪破碎, 酵母细胞破碎率可达到95 %以上, 而且有效地防止了ALDH 的分解及降解, 是一种较为理想的破碎方法。
    乙醇在人体内的代谢主要靠体内的两种酶[1], 一种是乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase, ADH) , 另一种是乙醛脱氢酶(Aldehyde Dehydrogenase, ALDH) 。前者使乙醇转化为乙醛, 后者使乙醛进一步转化为乙酸, 最终分解为二氧化碳和水。人体中, 一般都存在前一种酶,而且数量基本是相等的。但缺少后一种酶的人就比较多, ALDH 的缺少, 使乙醇不能被完全分解为水和二氧化碳, 而是以乙醛的形式继续留在体内。有资料表明[2],乙醛在人体内的过渡堆积是醉酒的主要原因。目前,ALDH 主要是从动物的肝脏、胰腺或肝细胞线粒体中分离提取, 但其资源有限且价格昂贵, 因此很难大规模生
产。为了拓展ALDH 的来源, 国内外科学工作者开始探索从微生物细胞中提取ALDH, 国外在此方面已做了大量的工作,并得到活性较高的ALDH。国内还没有见到从微生物细胞中提取ALDH 的报道。因此, 通过微生物的发酵、分离纯化ALDH, 具有很大的市场前景。
    从酵母中分离提纯ALDH 是一个较为复杂的过程, ALDH 为胞内产物[3], 大部分存在于线粒体中, 其他存在于胞液中, 首先必须将细胞破壁, 使产物得以释放,才能进一步提取。成熟的酵母菌细胞壁较厚, 不易被破碎, 而且ALDH 对温度及酸碱度很敏感, 容易失活。因此寻找一种既能高效破碎酵母细胞, 又能有效维持ALDH 稳定性的方法是非常必要的。本文对自溶、反复冻融、超声波和高压破碎仪破碎酵母细胞释放ALDH进行了较为系统的研究, 为从酵母中分离提取ALDH作准备。
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