0
关键词：
血小板,涂层毛细管电色谱,阿司匹林,帕珠沙星,结合常数
发表时间：
2011-10-09 10:04:48
摘要 获取真实准确的蛋白质糖基化信息是全面了解糖基化修饰生物学功能的前提.针对简单蛋白质的糖基化分析通常采用反相高效液相色谱-串联质谱技术在肽的水平上对糖基化信息进行采集和解析. 本文以人血清Alpha-1-酸性糖蛋白(AGP)酶解液为对象,发展了一套简单有效的蛋白质糖基化分析方法. 本方法分为三个步骤, 第一步是建立糖肽的理论m/z 值表; 第二步是获取糖蛋白酶解液的LC-MS 谱图, 并将每一个色谱峰中所包含糖肽的实际m/z 值与理论m/z 值进行人工匹配; 第三步是对每个色谱峰的糖肽结构归属进行LC-MS/MS 验证. 采用本方法, 我们从AGP 酶解液中共鉴定出172 条糖肽. 与单独采用Survey 模式的方法相比, 本方法能够显著提高糖肽的覆盖率.
糖基化修饰是一种常见而重要的蛋白质翻译后修饰, 不仅影响蛋白质的理化性质, 而且在细胞识
别、信号转导、肿瘤浸润和转移以及免疫应答等多种细胞过程中发挥重要的生物学作用[1~6]. 蛋白质糖基化信息的获取是全面了解糖基化修饰生物功能的前提, 糖基化信息主要包括糖基化位点信息和位点上所连接聚糖结构的信息[7]. 与磷酸化蛋白质的磷酸化位点上只连接有磷酸根不同的是, 糖蛋白的糖基化位点上连接的聚糖具有更为复杂的微不均一性(microheterogeneity), 即同一糖基化位点上存在多种不同结构聚糖的现象[8]. 为了获取每个位点上的聚糖微不均一性信息, 针对简单糖蛋白的位点特异性分析(site-specific analysis)通常是把糖蛋白酶解成肽段, 然后采用反相色谱- 串联质谱联用技术(RPLC-MS and MS/MS)对酶解液中含有聚糖的肽段(即糖肽)进行结构鉴定[9~12]. 糖肽在反相色谱上的保留主要取决于肽段的序列, 因此, 具有相同肽段序列不同聚糖结构的糖肽的出峰时间非常接近, 在质谱的总离子流图(TIC)上往往包含在一个色谱峰中.而为了区分TIC 谱图中的糖肽信息和非糖肽信息,质谱检测通常在Survey 模式下进行, 通过提取糖肽特征碎片的质核比(m/z)如204(乙酰葡糖胺)即可得到糖肽的专属信息[13]. 由于Survey 模式是对同一样品交替扫描一级谱和二级谱, 导致一级谱中的糖肽信号会由于部分糖肽做二级谱而损失, 因此, 通常还需对相同样品做一次一级扫描以获取糖肽的真实一级谱图[12]. 本文以人血清Alpha-1-酸性糖蛋白(AGP)酶解液为对象, 以糖肽理论m/z 值表和独立进行的LC-MS 和LC-MS/MS 分析为基础, 发展了一套简单有效的蛋白质糖基化分析方法. 本方法分为三个步骤, 第一步是建立糖肽的理论m/z 值表; 第二步是获取糖蛋白酶解液的LC-MS 谱图, 并对LC-MS 谱图中糖肽的色谱峰进行人工归属, 方法是将每一个色谱峰中所包含肽段的m/z 值与理论m/z 值进行匹配; 最后一步是对每个色谱峰的糖肽归属进行LC-MS/MS验证.
别、信号转导、肿瘤浸润和转移以及免疫应答等多种细胞过程中发挥重要的生物学作用[1~6]. 蛋白质糖基化信息的获取是全面了解糖基化修饰生物功能的前提, 糖基化信息主要包括糖基化位点信息和位点上所连接聚糖结构的信息[7]. 与磷酸化蛋白质的磷酸化位点上只连接有磷酸根不同的是, 糖蛋白的糖基化位点上连接的聚糖具有更为复杂的微不均一性(microheterogeneity), 即同一糖基化位点上存在多种不同结构聚糖的现象[8]. 为了获取每个位点上的聚糖微不均一性信息, 针对简单糖蛋白的位点特异性分析(site-specific analysis)通常是把糖蛋白酶解成肽段, 然后采用反相色谱- 串联质谱联用技术(RPLC-MS and MS/MS)对酶解液中含有聚糖的肽段(即糖肽)进行结构鉴定[9~12]. 糖肽在反相色谱上的保留主要取决于肽段的序列, 因此, 具有相同肽段序列不同聚糖结构的糖肽的出峰时间非常接近, 在质谱的总离子流图(TIC)上往往包含在一个色谱峰中.而为了区分TIC 谱图中的糖肽信息和非糖肽信息,质谱检测通常在Survey 模式下进行, 通过提取糖肽特征碎片的质核比(m/z)如204(乙酰葡糖胺)即可得到糖肽的专属信息[13]. 由于Survey 模式是对同一样品交替扫描一级谱和二级谱, 导致一级谱中的糖肽信号会由于部分糖肽做二级谱而损失, 因此, 通常还需对相同样品做一次一级扫描以获取糖肽的真实一级谱图[12]. 本文以人血清Alpha-1-酸性糖蛋白(AGP)酶解液为对象, 以糖肽理论m/z 值表和独立进行的LC-MS 和LC-MS/MS 分析为基础, 发展了一套简单有效的蛋白质糖基化分析方法. 本方法分为三个步骤, 第一步是建立糖肽的理论m/z 值表; 第二步是获取糖蛋白酶解液的LC-MS 谱图, 并对LC-MS 谱图中糖肽的色谱峰进行人工归属, 方法是将每一个色谱峰中所包含肽段的m/z 值与理论m/z 值进行匹配; 最后一步是对每个色谱峰的糖肽归属进行LC-MS/MS验证.
于晓莉发布的其他共享资料
-
-
关键词： 钌、锇的混配络合物,ECD 谱理论解析,TDDFT 计算,手征光学性质 发表时间： 2011-10-09 10:02:45
-
关键词： 糖基化分析,Alpha-1-酸性糖蛋白,糖肽,质谱 发表时间： 2011-10-09 10:01:07
-
关键词： 近红外光谱,食用植物油,脂肪酸,定性识别,定量分析 发表时间： 2011-09-13 16:50:32
-
关键词： 左旋苯环壬酯,组织分布,液相色谱串联质谱法 发表时间： 2011-09-13 14:45:08
-
关键词： 小鼠原代肝细胞,异烟肼,利福平,CYP2E1,CYP3A,肝细胞毒性 发表时间： 2011-09-13 14:43:14