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窖泥细菌群落结构演替及其与环境因子的相关性

沈从强 | -> | 1386| 0| 0.556088MB |微生物,窖泥,细菌,群落结构,环境因子,变性梯度凝胶电泳

沈从强 沈从强 | 文档量 |浏览量15311

摘要: 利用PCR-DGGE 系统研究了剑南春不同窖龄(2~50 年)窖泥的微生物群落结构、种群演替趋势及其与环境因子的相关性。结果表明,2 年窖龄窖泥的细菌丰度和多样性指数与5 年样品相似,而10 年窖龄窖泥的细菌丰度和多样性指数则明显增加,之后的10 年基本持平,但50 年时又显著下降。相同窖龄的窖泥样品中,中层的物种丰度和多样性指数均高于上层和下层,特别是在2~5 年样品中这一趋势更加明显。DGGE 和序列分析显示,窖泥中优势种群均分布在厚壁菌门(Phylum Firmicutes)的杆菌纲(Class Bacill)和梭菌纲(Class Clostrida),其中耐酸乳杆菌
(Lactobacillus acetotolerans)、芽孢菌(Bacillus fordii)、未培养的瘤胃菌(uncultured Ruminococcaceae bacterium)和梭菌(uncultured Clostridia bacterium)为窖泥样品中的主要优势种群。典型对应分析显示,窖泥微生物群落结构与环境因子具有显著的相关性,其中有效磷、氨氮、pH 对微生物群落结构的影响较大,其次是腐殖质,而水分含量的影响较小。
    浓香型白酒的生产是以窖泥微生物、大曲微生物、糟醅微生物等复杂的物质能量代谢过程为前提, 其中窖泥微生物的作用使得浓香型白酒产生浓郁的窖香[1]。生产经验表明,窖池窖龄与酿酒质量关系极为密切,只有老窖才能出好酒。如以泸州特曲为代表的浓香型白酒,有些专家认为,50 年以上的老窖才能生产特头曲,20 年左右的窖池只能生产二曲、三曲酒[2],由此可见,老窖池对于浓香型白酒生产及品质的重要性。窖泥微生物区系极为复杂,它是经过长期的驯化和演替而逐渐形成的。前人利用传统方法对窖池微生物区系的解析[3]、纯种分离及作用机理[4-8]等方面做了大量研究工作,为大曲白酒的发展做出了重大贡献。但研究表明,通常环境中可培养的细菌仅占细菌总数的0.1 %~10 %[9-10], 大量的细菌不能培养或现阶段难于培养,因此,采用传统的分离培养方法研究窖泥微生物区系有一定的局限性。
   近年来, 有些学者尝试借助于现代分子生物学技术研究窖泥微生物群落,如罗惠波等采用PCR-SSCP 技术研究窖池微生物群落[11-12], 邓依等采用16S-23S rRNAITS-AFLP 指纹图谱分析窖泥原核微生物多样性[13],陕小虎等对利用PCR-DGGE 技术研究窖泥微生物的电泳条件进行了优化和探讨[1]。3 种方法比较,DGGE 除了可较好地反映样品的微生物群落结构外, 还可对优势条带切胶回收,并进行序列测定和分析,从而可以进一步了解优势菌种的种属分类。总体来说,利用现代分子生物学方法系统研究窖泥微生物群落结构与演替趋势, 以及与环境因子的相关性研究相对较少。本研究以剑南春不同窖龄的窖泥为研究对象, 采用PCR-DGGE 技术对不同窖龄窖泥的微生物群落结构和变化趋势进行系统研究, 并利用典型对应分析(CCA)探讨了微生物群落结构与环境因子的相关性, 为全面了解窖泥微生物区系分布及主要功能微生物, 进而为老窖环境的人工模拟及条件控制提供理论依据。
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