多重机制杂质吸附萃取净化_快速液_省略_质谱法测定鱼组织中11种同化激素_姚珊珊

摘要: 建立了准确、灵敏的鱼组织中11 种同化激素( 勃地酮、雄烯二酮、诺龙、美雄酮、甲睾酮、睾酮、醋酸睾酮、群勃龙、丙酸睾酮、康力龙、氟甲睾酮) 的多重机制杂质吸附萃取净化-快速液相色谱-串联质谱的分析方法。鱼组织均质样品经甲醇提取后，在上清液中加入一定量的C18固体吸附剂、中性氧化铝吸附剂和氨基功能化纳米吸附剂实现快速净化。采用Shim-Pack XR-ODSⅡ色谱柱( 100 mm × 2. 0 mm，2. 2 μm) 分离，以乙腈( 含0. 1% 甲酸) 和水( 含0. 1%甲酸) 为流动相进行梯度洗脱，电喷雾正离子多反应监测( MRM) 模式下检测，外标法定量。结果表明， 11 种目标化合物在线性范围内具有良好的线性关系，相关系数大于0. 999，其在鱼组织中的检出限( S /N ＞ 3) 为0. 03 ～0. 4 μg /kg，定量限( S /N ＞ 10) 为0. 1 ～ 1. 5 μg /kg，平均回收率为80. 9% ～ 98. 1%，相对标准偏差( RSD) 为5. 2% ～11. 5%。该方法简便、快速、准确，可用于鱼组织中同化激素的定性、定量监测。

    同化激素，亦称蛋白同化激素，它能促进细胞的生长与分化，并使肌肉扩增。在水产行业中，同化激素被添加在饲料中，利用其蛋白同化作用，促进鱼类生长和提高饲料转化率。但如果滥用同化激素，会造成在动物体内的残留，被人食用后进入人体，会损害肝脏，引起水肿或血钙过高，严重的还会造成男女性别特征紊乱及致癌。为此，中国、日本、欧盟等国家和组织相继制定了相应的法律限制或禁止同化激素在动物饲养中应用。2002 年9 月，农业部出台《无公害食品渔药使用准则》规定: 甲基睾丸酮( 包括丙酸睾丸素、去氢甲睾酮以及同化物等雄性激素) 为禁用渔药［1］。农业部第235 号公告规定了《动物性食品中兽药最高残留限量》，甲基睾丸酮、群勃龙等为禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出［2］。因此开展水产鱼类中的激素类药物残留的快速分析方法研究具有重要的现实意义。
    有关同化类激素药物残留的检测方法主要有气相色谱-质谱法( GC-MS ) ［3 － 7］、高效液相色谱法( HPLC ) ［8］ 和液相色谱-质谱法( LC-MS ) ［9 － 13］。HPLC 法的灵敏度较低，基质干扰大，对前处理要求高。GC-MS 方法虽然灵敏度和特异性都很高，但衍生过程繁琐。HPLC-MS 方法灵敏度高，选择性和特异性好，能够对低浓度的样品进行很好的确认，已用于各种不同基质中同化激素残留的测定。目前，采用LC-MS 法测定痕量兽药残留的样品处理多采用固相萃取( SPE) 法［4， 12 － 15］，该方法可同时完成样品的富集与净化，净化效果较好，但是固相萃取小柱成
本较高，而且有机溶剂的使用量较大，一般情况下需同时采用有机溶剂淋洗和洗脱，操作繁琐费时。也有文献报道采用低温脱脂净化的快速前处理方法［11］，但该处理方法过于简单，净化后的样品溶液中杂质依然较多，基质效应较严重，且容易污染仪器和色谱柱。因此，开展一种新型、环保、简便的样品预处理方法研究十分必要。QuEChERS ( quick，easy，cheap，effective，rugged and safe ) 方法作为一种简便、快速、安全、价格低廉的分析方法，主要用于农产品中农药多残留检测。近年来也有报道将此方法用于兽药残留领域［16］，但由于样品基质的不同，兽药和农药的化学性质不同等因素，QuEChERS在兽药残留领域的应用还很有限。多重机制杂质吸附萃取净化方法( multi-function impurity adsorption solid-phase extraction，MAS) ［17］是一种最新
提出的基于介质分散固相萃取的方法，此方法将QuEChERS 方法推广到了兽药残留分析领域。该
方法主要通过多种功能化吸附材料，将样品中的主要干扰杂质吸附，有效地去除基体中可能存在的磷脂、脂肪和部分蛋白质等，同时将被测物质留在样品溶液中，而达到净化和富集的目的。该方法快速、简单，可大大节省样品前处理的时间。本文将MAS 净化方法应用于鱼组织中同化激素残留的检测，优化了样品提取溶剂和MAS 净化程序，建立了一种简便、环保、快速、准确的鱼组织中11 种同化激素( 勃地酮、雄烯二酮、诺龙、美雄酮、甲睾酮、睾酮、醋酸睾酮、群勃龙、丙酸睾酮、康力龙、氟甲睾酮) 的MASLC-MS /MS 分析方法，取得了较为满意的结果。