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关键词：
共振光散射,槲皮素,超分子,氢键
发表时间：
2012-03-25 14:18:08
液相色谱_电喷雾_四级杆_飞行时间质谱法分析琼胶寡糖
段依依 | -> | 1458| 1| 0.816452MB |琼胶寡糖,BEH Amide色谱柱,液相色谱,电喷雾-四级杆-飞行时间质谱
摘要建立超高效液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间质谱联用技术快速分离鉴定琼胶寡糖的方法。通过
分析比较3 种色谱柱( BEH Amide、BEH C8及Atlantis T3) 对琼胶寡糖的分离结果发现，Amide 色谱柱具有最佳优势，在无需样品衍生的状态下，可使聚合度介于3 ～ 29 的琼胶寡糖得以良好分离，分析迅速，灵敏度高。而衍生后，则是采用Atlantis T3 柱分离效果最佳，在紫外吸收色谱图上分离状态良好。色谱通过与电喷雾-四级杆-飞行时间质谱联用，能准确获得每个色谱信号对应的质谱结构信息，谱图清晰、简单，归属容易。
分析比较3 种色谱柱( BEH Amide、BEH C8及Atlantis T3) 对琼胶寡糖的分离结果发现，Amide 色谱柱具有最佳优势，在无需样品衍生的状态下，可使聚合度介于3 ～ 29 的琼胶寡糖得以良好分离，分析迅速，灵敏度高。而衍生后，则是采用Atlantis T3 柱分离效果最佳，在紫外吸收色谱图上分离状态良好。色谱通过与电喷雾-四级杆-飞行时间质谱联用，能准确获得每个色谱信号对应的质谱结构信息，谱图清晰、简单，归属容易。
琼胶是海洋中含量极为丰富的多糖。琼胶寡糖是由1，3联接的β-D-半乳吡喃糖和1，4联接的3，6
-内醚-α-L-半乳吡喃糖残基，通过反复交替联接而生成的链状中性糖( 图1) ，包括琼寡糖和新琼寡糖［1］。
通常，β-琼胶酶( 海洋菌株中分离出的主要琼胶酶) 可以裂解琼胶糖的β-1，4糖苷键，生成以β-D-半乳糖为还原性末端和以3，6-内醚-α-L-半乳糖为非还原性末端的新琼寡糖( Neoagaro-oligosaccharides) 系列; α-琼胶酶则裂解琼胶糖的α-1，3糖苷键，生成以β-D-半乳糖为非还原性未端和以3，6-内醚-α-L-半乳糖为还原性末端的琼寡糖( Agaro-oligosaccharides) 系列［2］。研究发现，新琼寡糖没有显著的生理活性，而琼寡糖则具有多种活性，且这些活性与寡糖的聚合度( Ddegree of polymerization，DP) 密切相关，此性质在琼寡糖药物开发及植物病害防御方面起重要作用［3］。关于不同聚合度寡糖的制备方法研究已有报道［4］，建立一种快速、灵敏、稳定的寡糖定性分析方法，实时监控寡糖水解进程以及实现进一步生化分析尤为重要。
高效液相色谱( HPLC) 具有快速、灵敏和样品处理简单等优点，已成为糖类分析的重要工具。有研究者采用反相离子对色谱法分析寡糖［5］，但该方法存在柱稳定时间较长、质谱分析中本底干扰高等不足; 也有研究者采用柱前衍生紫外或荧光检测法，但样品衍生操作复杂，耗时耗力［6］，限制了寡糖相关的深入研究。由于分析方法的局限性，至今还未见分离鉴定琼胶寡糖数超过22 的报道［7］。本研究以琼胶寡糖为研究对象，利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱( UPLC-Q-TOF-MS) 系统，选用Amide 色谱柱，在无需样品衍生的状态下使聚合度介于3 ～ 29 的琼胶寡糖得以成功分离，并可获得其准确质谱信息，结果优于对照组采用柱前衍生在反相色谱柱C8和T3 上的分析结果。
-内醚-α-L-半乳吡喃糖残基，通过反复交替联接而生成的链状中性糖( 图1) ，包括琼寡糖和新琼寡糖［1］。
通常，β-琼胶酶( 海洋菌株中分离出的主要琼胶酶) 可以裂解琼胶糖的β-1，4糖苷键，生成以β-D-半乳糖为还原性末端和以3，6-内醚-α-L-半乳糖为非还原性末端的新琼寡糖( Neoagaro-oligosaccharides) 系列; α-琼胶酶则裂解琼胶糖的α-1，3糖苷键，生成以β-D-半乳糖为非还原性未端和以3，6-内醚-α-L-半乳糖为还原性末端的琼寡糖( Agaro-oligosaccharides) 系列［2］。研究发现，新琼寡糖没有显著的生理活性，而琼寡糖则具有多种活性，且这些活性与寡糖的聚合度( Ddegree of polymerization，DP) 密切相关，此性质在琼寡糖药物开发及植物病害防御方面起重要作用［3］。关于不同聚合度寡糖的制备方法研究已有报道［4］，建立一种快速、灵敏、稳定的寡糖定性分析方法，实时监控寡糖水解进程以及实现进一步生化分析尤为重要。
高效液相色谱( HPLC) 具有快速、灵敏和样品处理简单等优点，已成为糖类分析的重要工具。有研究者采用反相离子对色谱法分析寡糖［5］，但该方法存在柱稳定时间较长、质谱分析中本底干扰高等不足; 也有研究者采用柱前衍生紫外或荧光检测法，但样品衍生操作复杂，耗时耗力［6］，限制了寡糖相关的深入研究。由于分析方法的局限性，至今还未见分离鉴定琼胶寡糖数超过22 的报道［7］。本研究以琼胶寡糖为研究对象，利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱( UPLC-Q-TOF-MS) 系统，选用Amide 色谱柱，在无需样品衍生的状态下使聚合度介于3 ～ 29 的琼胶寡糖得以成功分离，并可获得其准确质谱信息，结果优于对照组采用柱前衍生在反相色谱柱C8和T3 上的分析结果。
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