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关键词：
可溶性环氧化物水解酶,抑制剂,高通量筛选
发表时间：
2013-08-15 10:01:58
摘要: 本研究拟建立体外人源可溶性环氧化物水解酶 (hsEH) 抑制剂高通量筛选模型, 筛选hsEH 抑制剂。利用大肠杆菌表达重组hsEH, 化学合成其特异性的底物PHOME, 建立了基于荧光测定的以384 孔微板为载体的hsEH 抑制剂高通量筛选模型 (Z ' = 0.65)。对47 360 种样品 (包括25 040 种化合物和22 320 种天然产物) 进行初筛, 选择初筛抑制率大于80%的950 种样品作为活性样品进行复筛。最终确定2 个化合物具有较强的抑制活性, 其IC50 值分别为8.56 和4.31 μmol·L−1。结果表明, 所建立的hsEH 抑制剂高通量筛选模型具有灵敏、稳定、重复性好的特点。
环氧化物水解酶 (epoxide hydrolase, EH,EC.3.3.2.3) 是脊椎动物体内广泛存在的可以水解外源性以及内源性环氧化物生成二醇衍生物的一种酶,由554 个氨基酸残基组成, 分子质量约为60 kDa。在哺乳动物EH 可以分为微粒体型、胆固醇型、白三烯A4 型以及胞质型 (即可溶性EH, sEH) 等类型。这几种EH 序列同源性很低 (氨基酸同源性<5%), 底物特异性明显不同[1−3]。
环氧化物水解酶 (epoxide hydrolase, EH,EC.3.3.2.3) 是脊椎动物体内广泛存在的可以水解外源性以及内源性环氧化物生成二醇衍生物的一种酶,由554 个氨基酸残基组成, 分子质量约为60 kDa。在哺乳动物EH 可以分为微粒体型、胆固醇型、白三烯A4 型以及胞质型 (即可溶性EH, sEH) 等类型。这几种EH 序列同源性很低 (氨基酸同源性<5%), 底物特异性明显不同[1−3]。体外[6]。多项研究显示, sEH 参与了高血压、缺血性损伤等心脑血管疾病进程, 为临床治疗和药物研发提供了一个新颖的作用靶点[7−11]。
本研究通过利用大肠杆菌表达重组hsEH 蛋白,并合成其特异性底物PHOME, 建立了基于荧光分析的灵敏、特异和操作性强的高通量筛选模型, 用于本中心样品库的高通量筛选, 为寻找hsEH 抑制剂提供有力的工具。
本研究通过利用大肠杆菌表达重组hsEH 蛋白,并合成其特异性底物PHOME, 建立了基于荧光分析的灵敏、特异和操作性强的高通量筛选模型, 用于本中心样品库的高通量筛选, 为寻找hsEH 抑制剂提供有力的工具。
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