人参药材皂苷类成分UPLC特征图谱的质量评价方法

摘要: 建立人参药材皂苷类成分超高效液相色谱 (UPLC) 特征图谱的质量评价方法。以人参药材为研究对象, 采用RP-UPLC 法, 色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18 (50 mm × 2.1 mm ID, 1.7 μm), 乙腈-水二元梯度洗脱模式, 流速为0.3 mL·min−1, 检测波长为203 nm, 建立了11 批不同产地人参药材皂苷类成分UPLC 特征图谱。特征图谱有15 个共有色谱峰, 并采用对照品指认了其中的9 个色谱峰。对不同产地的人参皂苷类成分特征图谱进行聚类分析和主成分分析, 并用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统 (2004B 版)”对其质量进行了评价。所建立的人参皂苷类成分的特征图谱特征性和专属性强, 且该方法快速、简便、可靠, 可用于全面控制人参的质量。

    人参来源于五加科人参属植物人参 (Panax ginseng C.A. Mey.) 的干燥根及根茎, 具有大补元气、固脱生津、安神等功效[1], 在临床上应用非常广泛。文献[2]记载人参的引种栽培历史悠久, 自然环境的恶化、滥采滥挖严重破坏了人参赖以生存的生态环境, 目前人参主要分布于辽宁东部、吉林东半部和黑龙江东部。人参皂苷是人参的主要活性成分, 其中人参皂苷Rb1、Re 和Rg1 作为人参含量较高的主要活性成分, 《中国药典》2010 年版 (一部) 通过对这3 种皂苷的最低含量限定来控制人参药材的质量[1]。但人参中人参皂苷的种类繁多、药理活性各异, 仅以3 种人参皂苷为指标来控制人参药材的质量难以全面反映其质量的优劣。
    中药特征图谱是中药整体性的化学表征, 该项研究是近年来中药质量控制方法的一个研究热点,GC-MS、HPLC、CE 和TLC 等技术在中药特征图谱研究方面已经取得了很大的进展。目前, 人参的特征图谱研究包括HPTLC、HPLC、CE、NMR、FT-IR和X 衍射等多方面色谱、光谱手段探究人参的质量控制[3−9], 比较来讲, HPLC 法具有高效、快速、灵敏、重现性好、应用范围广等特点, 已成为中药色谱特征图谱研究的首选方法。但人参皂苷类成分结构差异在糖的位置、数量, 极性非常相近而难以达到很好的分离, 导致色谱分析时间长达80 min 以上, 特别是人参的特征图谱[4]。超高效液相色谱 (ultra-performanceliquid chromatography, UPLC) 是一种新的液相色谱技术, 该技术突破了传统HPLC 的系统耐压6 000 psi而达到15 000 psi (1 psi ≈ 6.9 kPa), 并采用1.7 μm 的小粒径作为色谱柱填料, 极大地提高了分离速度、分析灵敏度, 缩短了分析时间。本文采用二元梯度洗脱模式, 建立了人参药材的UPLC 特征图谱和质量评价方法, 11 批不同产地的人参样品均得到了较好的分离; 同时应用SPSS16.0 软件对数据结果进行系统聚类分析和主成分分析, 并采用国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统” (2004版) 软件对不同产地人参进行质量评价, 取得了比较理想的分析结果, 为人参药材的质量评价提供了依据。