柱层析法分离万寿菊叶黄素

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摘􀀁 要: 本试验研究了万寿菊叶黄素的分离方法及分离条件。采用高效液相色谱法( H PLC ) 测定叶黄素的含量, 色谱柱为岛津VP- ODSC18柱( 150mm 􀀂 4􀀁 6mm, 5􀀁m ) , 检测波长454nm; 以甲醇- 0􀀁1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱, 流速1􀀁0mL/m in; 柱温30 ; 进样量10􀀁L; 校准曲线法定量, 在0􀀁 6~ 2􀀁 0􀀁 g 范围内具有良好的线性关系, 回归方程为Y = 1􀀁 16 􀀂 107 C+ 4􀀁99 􀀂 104, 相关系数r= 0􀀁 9984。采用柱层析法分离万寿菊叶黄素的皂化液, 实验结果表明: 固定相采用硅胶G ( 100~ 200目) ; 胡萝卜素洗脱剂为V ( 石油醚)!V (乙酸乙酯) = 5 ! 1; 叶黄素洗脱剂为V ( 石油醚) !V ( 乙酸乙酯) = 1 ! 1; 层析柱规格为􀀂 26510mm; 使用皂化液直接湿法上样; 吸附时间为30m in; 上样量为0􀀁4mL皂化液/g 硅胶; 柱温为常温; 皂化液可直接上样; 在以上条件下, 经分离回收溶剂后得到含量为83􀀁 3% 的叶黄素产品。该方法有良好的分离能力, 便于操作, 产品纯度稳定。硅胶在重复使用5次以内, 对分离效果的影响不明显。
关键词: 叶黄素; 万寿菊; 分离; 柱层析
    叶黄素( lutein) 又称植物黄体素, 分子式为C40H56O2, 属四萜类化合物[ 1] 。叶黄素是人类食
物与血清中主要的类胡萝卜素之一, 并且是 , !- 类胡萝卜素的代表[ 2, 3] 。研究发现, 年龄相关
性黄斑退化(AMD ) 是发达国家老年人失明以及普通视觉损害的最重要原因[ 4~ 7] 。叶黄素和玉米
黄质作为抗氧化剂和近紫外蓝光的吸收剂, 可降低此类眼疾发生的风险。随着对叶黄素药理研究的深入, 还发现叶黄素在防治心血管动脉硬化、增强免疫力等方面起着重要作用[ 8, 9 ] 。万寿菊( Tagetes erecta) , 菊科万寿菊属, 原产于墨西哥。因其花叶黄素含量高, 其他种类类胡萝卜素少,
而成为生产叶黄素的理想原料[ 10 ] 。但是万寿菊中游离叶黄素很少, 主要是叶黄素酯( > 90% ) , 其脂肪酸部分包括月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸等十多种。研究表明, 叶黄素酯类衍生物不易被人体
直接吸收代谢, 人类功能性食品添加剂和药品对游离叶黄素的纯度要求较高。因此对叶黄素酯类物质进行皂化, 并且进一步分离叶黄素十分必要[ 11] 。
    文献[ 12] [ 13] 报道了重结晶法分离和纯化万寿菊叶黄素。虽然得到的叶黄素纯度较高(﹥ 90% ), 但是操作步骤复杂、收率低, 只适用于实验室少量制备。柱层析分离叶黄素的报道很少。本文采用柱层析法对万寿菊叶黄素的提取皂化物进行分离, 以期为工业生产提供依据。
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