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关键词：
涕灭威,降解菌,土壤微生物
发表时间：
2012-06-20 16:49:13
苏云金杆菌营养期蛋白杀虫活性及Vip3A_LS1基因克隆
牛润峰 | -> | 692| 0| 195.537MB |苏云金杆菌,营养期杀虫蛋白,活性,Vip3A-LS1基因克隆
摘 要: 对营养期高活性杀虫菌株进行筛选, 得到高效菌株B t LS1, 对其营养期杀虫蛋白活性及发酵特性进行了系统研究, 克隆了该菌株的vip 3A 新基因。测定了31株vip 3A 基因阳性菌株营养期杀虫蛋白的活性, 发现B t LS1和B t LS8菌株对甜菜夜蛾Spodop tera ex igua生长的抑制作用明显高于其他菌株。进一步研究表明, B t LS1菌株营养期杀虫蛋白对初孵和2 龄甜菜夜蛾幼虫的体重增长抑制率分别为95. 3% ? 2. 1% 和90. 7% ? 6. 6% ; 对棉铃虫H elicoverpa arm ig era 初孵幼虫的校正死亡率为22. 1%, 对2龄幼虫的体重增长抑制率为78. 7% ? 6. 6%。发酵液中以胞内可溶性物质为主。设计vip 3A 全长基因特异引物PCR 扩增, 插入质粒pB lue SK ( + ) , 克隆测序证实该菌株中存在vip 3A 新基因, 命名为Vip 3A-LS1, G enBank登录号为DQ016968。按该序列推断的蛋白与同类蛋白的8个氨基酸之间存在差异。
苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis ( B t) 是目前研究最深入、应用最广泛的生防微生物, 随着B t制剂长期广泛的使用及转基因植物的大面积推广, 害虫对其的抗药性问题已较为突出[ 1 ~ 3 ] 。近年来, 在某些B t菌株中发现了在遗传和杀虫机理上与其杀虫晶体蛋白均不相同的新型杀虫蛋白) ) )营养期杀虫蛋白( vegetat ive insectic idal pro te ins,V IPs) , 该类蛋白对鳞翅目夜蛾科害虫具有广谱和特异的杀虫活性[ 4~ 9] , 这一发现对于高效广谱基因工程微生物的构建、转基因抗虫植物的培育及控制害虫抗性发展都具有重要意义。
目前有关营养期杀虫蛋白的研究主要涉及昆虫新毒性基因的克隆表达、杀虫机理以及基因重
组利用等方面[ 2~ 11], 而对于该类蛋白在B t自然菌株中的杀虫活性及分泌特性尚缺乏相关研究资料。为了进一步发掘自然资源, 明确该类蛋白在B t菌株中的杀虫活性及发酵特点, 从中得到高毒性营养期杀虫菌株和vip 3A 新基因, 笔者以土壤中分离所得菌株为材料, 通过分子鉴定结合生物测定, 对B t菌株中营养期蛋白的杀虫活性及发酵特性进行了系统研究, 以期为直接利用高活性营养期杀虫菌株、获得高效营养期杀虫蛋白新基因及开发新型微生物杀虫剂提供参考。
目前有关营养期杀虫蛋白的研究主要涉及昆虫新毒性基因的克隆表达、杀虫机理以及基因重
组利用等方面[ 2~ 11], 而对于该类蛋白在B t自然菌株中的杀虫活性及分泌特性尚缺乏相关研究资料。为了进一步发掘自然资源, 明确该类蛋白在B t菌株中的杀虫活性及发酵特点, 从中得到高毒性营养期杀虫菌株和vip 3A 新基因, 笔者以土壤中分离所得菌株为材料, 通过分子鉴定结合生物测定, 对B t菌株中营养期蛋白的杀虫活性及发酵特性进行了系统研究, 以期为直接利用高活性营养期杀虫菌株、获得高效营养期杀虫蛋白新基因及开发新型微生物杀虫剂提供参考。
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