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土壤稀有放线菌的选择性分离及其抗菌活性研究

牛润峰 | -> | 911| 1| 261.702MB |稀有放线菌,选择性分离,抗菌活性

牛润峰 牛润峰 | 文档量 |浏览量11206

摘 要: 在优化土壤稀有放线菌选择性分离方法的基础上, 对从安徽、浙江、山东、陕西等地采集的
31份土样中的稀有放线菌进行了选择性分离。结果表明: 以改进的HV 培养基为分离培养基, 将土壤样品稀释100倍, 添加2 @ 10- 5 g /mL重铬酸钾+ 2 @ 10- 5 g /mL萘啶酮酸+ 1 @ 10- 5 g /mL卡那霉素作为抑制剂分离效果最好。以常见植物病原真菌和细菌为指示菌, 从分离的417株放线菌中筛选出H32、H75、H223、H 227、H238等5株可代谢抗菌活性物质的菌株。离体条件下, 5株放线菌菌株发酵液对小麦根腐病菌B ip olaris sorokiniana、玉米大斑病菌Ex serohilum turcicum、烟草赤星病菌Alternaria alternate的菌丝生长和孢子萌发均有强烈的抑制作用, 其中H223和H238菌株发酵液对病原真菌菌丝生长的抑制中浓度( EC50 )值均小于10mL /L; H32菌株发酵液对小麦根腐病菌、玉米大斑病菌、烟草赤星病菌孢子萌发的EC50值分别为25. 5、28. 9和29. 9mL /L。5株放线菌发酵液对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑制作用显著, 其中H223菌株发酵液抑制作用最强, 抑菌圈达30mm 以上。盆栽实验结果表明, 5株放线菌发酵液对小麦白粉病的保护效果为73. 45%~ 82. 35%, 治疗效果为67. 74% ~ 70. 80%。
    放线菌是极具代谢多样性的微生物, 迄今为止, 世界上已发现的抗生素大约有三分之二是由放线菌产生的, 其中70% 以上由链霉菌产生[ 1, 2] 。随着具有生物活性的菌株被大量地发现, 再用传统方法分离放线菌往往造成重复研究, 使从中发现新化合物的几率降低[ 3, 4 ] , 这使得继续从链霉菌中寻找新的抗生素变得日益困难。稀有放线菌是指那些用传统方法分离时分离频度远远低于链霉菌的放线菌, 通常意义上是指非链霉菌[ 4] 。日本、美国、英国等国家对稀有放线菌研究较早, 但其分离程序长期以来均被各国作为技术机密加以保护。我国自20世纪90年代开始对稀有放线菌分离方法进行立项研究[ 3] , 已发展了不同类型放线菌的高选择性分离方法[ 3~ 6] , 并相继在5国际系统与进化微生物杂志6 ( IJSEM )上陆续发表新的科、属和种[ 7~ 13] 。
    在微生物药物开发中, 一条重要的策略是分离那些未被开发且同时又是次级代谢产物良好生
产者的微生物群体[ 14 ] 。虽然稀有放线菌越来越被证明具有产生新化合物的潜力, 但对其遗传和生理学知识还知之甚少, 而发展新的稀有放线菌分离方法对于扩展我们对稀有放线菌的生态学、分类学和生物活性的理解至关重要[ 15] 。
    笔者以改进的选择性分离方法对31份不同来源的土壤样品进行了稀有放线菌的选择性分离及
其抗菌活性的研究。
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