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关键词：
华蟾素,人肝癌细胞株HepG2,增殖,细胞凋亡
发表时间：
2013-08-26 17:08:57
摘要: 为了观察华蟾素体外抑制肝癌细胞株HepG2 增殖、诱导细胞凋亡作用及其机制, 将不同浓度华蟾素作用于HepG2 细胞。采用MTT 法观察华蟾素对HepG2 细胞的增殖抑制作用; 用Hoechst 33258 染色法观察细胞凋亡的形态学改变; 以流式细胞术观察细胞的凋亡率和细胞周期的变化; 以实时荧光定量PCR 技术 (real time-PCR) 和蛋白免疫印迹 (Western blotting) 法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax 及p53 mRNA 水平和蛋白水平的表达情况。结果表明, 华蟾素对体外培养的肝癌HepG2 细胞有抑制增殖作用, 且具有剂量、时间相关性; 华蟾素可致HepG2 细胞阻滞于G2/M 期, 细胞凋亡率随药物浓度增加亦呈增长趋势; 细胞凋亡相关因子Bax 及p53mRNA 和蛋白表达上调, Bcl-2 的mRNA 和蛋白表达下调。因此, 华蟾素可抑制肝癌细胞株HepG2 的增殖, 诱导肝癌HepG2 细胞凋亡, 其机制可能与调节凋亡相关因子Bcl-2、Bax 及p53 的表达有关。
华蟾素是中华大蟾蜍皮经过水化萃取而成的中药制剂, 具有清热解毒、利水消肿、化瘀溃坚等作用,目前已成为我国临床上应用较广的抗肿瘤中药制剂之一, 尤其对消化道肿瘤具有较好的疗效。近年来,随着对华蟾素药理学研究的进一步深入, 已分离出其主要活性成分为蟾毒内酯类化合物, 属强心苷类物质, 包括蟾毒灵、脂蟾蜍配基、华蟾素毒基等[1]。临床应用及基础实验研究证实, 华蟾素及其含有的活性成分对多种人肿瘤细胞有不同程度的抑制增殖、诱导分化、促进细胞凋亡及提高机体免疫水平等作用。细胞凋亡是一种细胞主动性死亡模式, 在肿瘤的形成和演变过程中起着重要的作用, 华蟾素对人胃癌细胞MGC-80-3 的生长有明显的抑制作用并且可以镜下观察到细胞呈凋亡特征[2]; 另外, 华蟾素能明显抑制白血病细胞株Jurkat 细胞生长, 且通过调节凋亡相关分子Bcl-2、Bax 的表达诱导细胞凋亡[3]。但是, 目前对华蟾素具体的抗肿瘤作用机制还缺乏深
入的认识, 并且其在肝癌中作用研究相对较少。因此,本实验观察了华蟾素对人肝癌细胞株HepG2 诱导凋亡的作用, 初步探讨可能的作用机制, 为其临床应用治疗肝癌提供理论和实验依据。
入的认识, 并且其在肝癌中作用研究相对较少。因此,本实验观察了华蟾素对人肝癌细胞株HepG2 诱导凋亡的作用, 初步探讨可能的作用机制, 为其临床应用治疗肝癌提供理论和实验依据。
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