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关键词：
板蓝根,抗病毒活性,神经氨酸酶,生物效价,品质评价
发表时间：
2012-07-16 15:42:05
摘 要 包涵体中的重组蛋白经抽提后可以在变性状态下纯化, 而纯化后的复性过程是基因工程下游处理的重要环节。通过对变应原Bla g 2 蛋白复性前后荧光光谱的比较和分析、变性剂( 尿素和SDS) 对复性后Blag 2 蛋白的荧光滴定实验、以及复性后Bla g 2 在不同pH 下的荧光光谱分析, 推断出Bla g 2 蛋白分子在不同环境下构象的变化及其光谱学特征, 初步建立了一种新的检测重组变应原蛋白变复性的光谱实验方法。
德国小蠊变应原Bla g 2 蛋白是一种天冬氨酸酶, 是引起致敏性疾病如过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性皮炎及过敏性结膜炎的主要致敏变应原之一。Bla g 2 蛋白由352 个氨基酸残基组成, 分子量为38558 道尔顿, 含有3 个N 末端糖基化位点。但通过原核表达载体获得的重组蛋白以包涵体的形式存在, 并不具备生物学活性。为获得有活性的蛋白, 需使用变性剂将包涵体溶解, 但同时也破坏了蛋白的构象。由于蛋白质的生物学功能在很大程度上取决于其空间结构和构
象, 一个伸展开来或随机排布的肽链是没有生物活性的, 因此需对变性后的蛋白重新进行折叠, 以得到正确构象及具有生物学活性的蛋白。对重组变应原蛋白复性过程中的构象分析, 可检测变应原的复性程度, 了解变应原蛋白结构与其免疫学活性之间的关系。目前对Bla g 2 蛋白结构的研究主要集中在其晶体结构的分析方面[1] , 对于Bla g 2 在溶液中的复性过程及其伴随的构象变化和光谱学特征尚未见系统报道。
光谱学方法和生物活性检测是目前重组蛋白折叠研究的主要实验方法[2] 。其中荧光光谱是20 世纪70 年代发展起来的用于研究溶液中蛋白质构象的一种有效方法。该方法通过对蛋白质中色氨酸和酪氨酸等发光残基的内源荧光或荧光标记物的外源荧光随自身微环境的改变而变化来推断蛋白质分子构象和结构的变化, 从而进一步阐明蛋白质结构与功能之间的关系[3] 。荧光分析法能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多光物理
信息, 从各个角度反映样品分子的成键和结构情况。该方法具有灵敏性高, 选择性强, 用样量少, 方法简便以及能够提供较多的光物理信息等优点, 已经广泛用于生物大分子的构象研究中[ 4, 5] 。
本文采用基因工程技术, 在大肠杆菌中表达德国小蠊的重组变应原, 通过亲和层析纯化得到不具有生物学活性的蛋白, 再通过透析复性得到活性Bla g 2 蛋白。通过荧光光谱进一步来研究Bla g 2 蛋白变复性前后及其在加入变性剂和不同的酸碱度等不同微环境中的光谱学特征及其变化规律, 初步建立起一种新的检测重组变应原蛋白变复性的光谱实验方法。
象, 一个伸展开来或随机排布的肽链是没有生物活性的, 因此需对变性后的蛋白重新进行折叠, 以得到正确构象及具有生物学活性的蛋白。对重组变应原蛋白复性过程中的构象分析, 可检测变应原的复性程度, 了解变应原蛋白结构与其免疫学活性之间的关系。目前对Bla g 2 蛋白结构的研究主要集中在其晶体结构的分析方面[1] , 对于Bla g 2 在溶液中的复性过程及其伴随的构象变化和光谱学特征尚未见系统报道。
光谱学方法和生物活性检测是目前重组蛋白折叠研究的主要实验方法[2] 。其中荧光光谱是20 世纪70 年代发展起来的用于研究溶液中蛋白质构象的一种有效方法。该方法通过对蛋白质中色氨酸和酪氨酸等发光残基的内源荧光或荧光标记物的外源荧光随自身微环境的改变而变化来推断蛋白质分子构象和结构的变化, 从而进一步阐明蛋白质结构与功能之间的关系[3] 。荧光分析法能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多光物理
信息, 从各个角度反映样品分子的成键和结构情况。该方法具有灵敏性高, 选择性强, 用样量少, 方法简便以及能够提供较多的光物理信息等优点, 已经广泛用于生物大分子的构象研究中[ 4, 5] 。
本文采用基因工程技术, 在大肠杆菌中表达德国小蠊的重组变应原, 通过亲和层析纯化得到不具有生物学活性的蛋白, 再通过透析复性得到活性Bla g 2 蛋白。通过荧光光谱进一步来研究Bla g 2 蛋白变复性前后及其在加入变性剂和不同的酸碱度等不同微环境中的光谱学特征及其变化规律, 初步建立起一种新的检测重组变应原蛋白变复性的光谱实验方法。
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