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关键词：
反相高效液相色谱,离子抑制剂,三氟乙酸,乙酸铵,食品添加剂,葡萄酒
发表时间：
2012-02-27 09:16:07
离子对反相液相色谱同时测定家兔血浆中的外源性磷酸肌酸及其代谢产物肌酸
叶兰兰 | -> | 1505| 1| 251.969MB |离子对反相高效液相色谱,药代动力学,磷酸肌酸,肌酸,家兔血浆
摘要: 建立了离子对反相高效液相色谱法( IP-RP-HPLC) 同时测定家兔血浆中外源性磷酸肌酸( PCr) 及其代谢产物肌酸( Cr) 的方法，用于研究外源性PCr 在家兔体内的药代动力学。以含离子对试剂四丁基硫酸氢铵( TBA) 的磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相，在Kromasil-C18色谱柱上进行梯度洗脱。采用内标法定量、以基线扣除法计算外源性PCr和Cr 的浓度。PCr 和Cr 的线性范围分别为10 ～ 7 500 mg /L 和10 ～ 1 500 mg /L; 日内和日间精密度均≤6. 2%，准确度分别为99． 7%～ 102． 2%和96． 5%～ 102． 4%; 萃取回收率均大于92%。静脉注射PCr 后，血浆中PCr 的消除为二室模型，消除半衰期为( 20. 4 ± 2. 7) min; 表观分布容积为( 0. 179 ± 0. 037) L/kg; 清除率为( 0. 019 ± 0. 002 )L/( kg·min) ; 静脉注射PCr 后血浆中迅即出现降解产物Cr，其达峰时间为30 min; 消除半衰期为( 43. 7 ± 4. 5)min。本方法的专属性强，准确度和精密度高，能特异性地测定家兔血浆中的PCr 和Cr。实际应用结果表明，该方法完全符合PCr 药代动力学生物分析方法学的要求。
磷酸肌酸( phosphocreatine，PCr) 是细胞能量代谢的重要生理活性物质，它作为一种高能磷酸盐组成能量穿梭系统( energy shuttle system) 使二磷酸腺苷( adenosine diphosphate，ADP) 磷酸化，从而保证了机体直接供能物质三磷酸腺苷( adenosine triphosphate，ATP) 的循环利用，在机体生理功能的维持中发挥十分重要的作用［1，2］。PCr 已能人工合成，外源
性PCr 的补充有助于机体在缺血缺氧状态下维持高能磷酸池于恒定水平，使器官免受损伤，现已开发为一种高效低毒的心肌保护药，并为英国马丁代尔大药典收载［3］，临床用于治疗心肌梗死、心力衰竭以及心脏手术时停搏液的附加成分［4 － 6］。此外，PCr还是不违反兴奋剂规则的运动比赛项目的首选运动补剂［1，2］，成为运动医学研究之热点。
PCr 的药效学已有众多研究，然而其药代动力学研究却罕见，仅有的3 篇早年发表的国外文献均采用分光光度法和化学发光法等非特异性生物分析方法［5，7，8］，其结果可信度不高。近年来，文献报道PCr 的降解产物肌酸( creatine，Cr) 具有广泛的药理活性［9 － 13］，但PCr 在体内代谢转化为Cr 的动力学过程的研究迄今仍处于空白状态。
性PCr 的补充有助于机体在缺血缺氧状态下维持高能磷酸池于恒定水平，使器官免受损伤，现已开发为一种高效低毒的心肌保护药，并为英国马丁代尔大药典收载［3］，临床用于治疗心肌梗死、心力衰竭以及心脏手术时停搏液的附加成分［4 － 6］。此外，PCr还是不违反兴奋剂规则的运动比赛项目的首选运动补剂［1，2］，成为运动医学研究之热点。
PCr 的药效学已有众多研究，然而其药代动力学研究却罕见，仅有的3 篇早年发表的国外文献均采用分光光度法和化学发光法等非特异性生物分析方法［5，7，8］，其结果可信度不高。近年来，文献报道PCr 的降解产物肌酸( creatine，Cr) 具有广泛的药理活性［9 － 13］，但PCr 在体内代谢转化为Cr 的动力学过程的研究迄今仍处于空白状态。
有鉴于此，本研究旨在建立一种离子对反相高效液相色谱法( ion-pair reversed-phase HPLC，IPRP-HPLC) 同时测定家兔血浆中PCr 和Cr 浓度，并以基线扣除( baselinesubtraction) 法计算家兔静脉注射PCr 后外源性PCr 及其代谢物Cr 的浓度，并应用于PCr 的药代动力学研究。
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