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关键词：
人体健康,ICP-AES,矿质营养,小麦籽粒,小麦微核心种质
发表时间：
2011-11-28 11:21:32
摘 要 对Goldview( GV) 作为荧光标记物的DNA 荧光毛细生物传感器进行了研究。以荧光毛细分析法(fluorescence capillary analysis , FCA) 为基础, 在毛细管内壁通过Poly2l2lysine 将202mer2ssDNA 探针固定,制成DNA 荧光毛细生物传感器(DNA fluorescence capillary biosensor , DNA2FCB) , DNA2FCB 与互补靶DNA 杂交, 通过GV 染色后, 检测杂交产物的荧光强度, 实现对靶DNA 的定性和定量分析。样品用量12μL , 靶DNA 的浓度在014～4 μmol ·L - 1 (214～24 mg ·L - 1 ) 范围内和荧光强度有良好的线性关系( y =651911 x + 31994 4 , r = 01998 9) ; RSD < 315 % , 检出限0139μmol ·L - 1 (212 mg ·L - 1 ) , 能达到定量检测靶DNA 的目的。用DNA2FCB 测定靶DNA 操作简便, 试样、试剂用量少, 测定成本极低, 能大大减少环境污染。
核酸是生命遗传信息的载体, 对核酸序列的结构分析和测定在生命科学中具有重大的意义。目前核酸的检测方法主要有DNA 传感器和DNA 芯片两种。DNA 芯片[1 , 2 ] 具有高密度的特性, 可同时进行上万个基因的检测, 在功能基因组的研究中有非常重要的应用价值。但是, 由于它的制作成本高, 仪器设备昂贵目前很难普及应用。近年来, 有关DNA 传感器的研究较多, 它具有成本低、省时、操作简单、灵敏度高、既可定性又可定量的优点, 已经成为一个新的研究热点。DNA 生物传感器根据选用的介质及换能器不同可分为电化学[3 , 4 ] 、压电晶体[5 ]和光学传感器[629 ]等多种。由于光学技术的成熟性, 在DNA 传感器的研究中, 光学传感器一直是首选对象。我们基于荧光毛细分析法[10212 ]对脱氧核糖核酸进行了测定, 在研究中采用的是Cy25 靶DNA 末端标记, 得到了满意的结果。但是, Cy25 DNA 末端标记成本较高, 也不适合实际样品的直接测定。因此, 考虑使用双链DNA 嵌入型荧光染料, 在DNA 探针和靶DNA 杂交形成双链后, 进行荧光标记。溴化乙啶(ethidium bromide , EB) [13 , 14 ] 与DNA分子双螺旋的碱基之间的大沟槽结合, 产生嵌入作用, 灵敏度较高, 已有15 年的应用历史。但是, EB 是一种强的细胞诱变剂, 可以致癌, 使用中会导致实验仪器和环境的污染,不利于环保, 废弃的EB 染液必须进行特殊地净化处理, 给研究工作带来诸多不便。GV[15 ] 是一种近两年推出的新型核酸染料, 灵敏度与EB 相当, 而且不具致癌性。GV 染色在紫外光源照射下与dsDNA 结合, 呈现绿色荧光, 而与ssDNA结合, 呈红色荧光, 能较好地区分dsDNA 与ssDNA。本研究选用GV 作为DNA 标记物对DNA 荧光毛细生物传感器进行了考察。
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