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关键词：
红豆杉,紫杉醇,注射液,高效液相色谱,血清,药代动力学
发表时间：
2013-07-09 10:57:39
摘要 目的: 建立皮革和头发中17种蛋白水解氨基酸的快速高效液相色谱分析方法。方法: 氨基酸用AccQ Tag 衍生试剂衍生后, 用Acc la im C18 ( 4. 6 mm @ 150 mm, 5 Lm )柱分离, 三元梯度洗脱。三元流动相为pH 为4. 45的140 mm o l# L- 1醋酸钠溶液、乙腈- 水( 60B40, v /v )、pH 为4. 95的140 mmo l# L- 1醋酸钠溶液, 以紫外检测器检测, 在32 m in内可简单快速地完成17种氨基酸的分析。结果: 17种氨基酸衍生物保留时间的RSD[ 1. 1% ( n = 5), 峰面积的RSD[ 5. 0% ( n = 5)。方法检测限( S /N= 3)为2. 92~ 4. 51 pm o ,l 线性范围2. 5~ 500 Lm ol# L- 1 (其中胱胺酸为1. 25~ 250 Lmo l# L- 1 ), 相关系数R2\ 0. 998, 皮革样品加标回收率在80. 1% ~ 102. 3%, 头发样品加标回收率在85. 3% ~ 103. 2%。结论: 该方法不仅简化了流动相的配制过程,降低了实验成本, 而且专属性高, 样品基体干扰小, 可完全满足皮革和头发水解液中氨基酸的测定。
随着现代皮革工业的发展, 皮革化工材料及制革理论都不断向现代化迈进, 由于生皮的主要组成是蛋白质, 整个制革过程离不开对蛋白质的研究, 氨基酸是构成蛋白质的基本单元, 因此分析氨基酸可对蛋白质与皮化材料的相互作用作深入研究, 从而可推动现代皮革工业的快速发展。而毛发是提取各种天然氨基酸的原料, 因此对皮革与毛发中氨基酸的分析具有非常重要的意义[ 1, 2] 。由于皮革和毛发性质特殊, 组成复杂, 文献对这2类物质中氨基酸的报道很少。早期的氨基酸分析多采用高效阳离子交换色谱- 柱后茚三酮衍生光度检测的方法, 该经典方法目前仍是很多法规标准的指定方法[ 3, 4] , 也是商品化的氨基酸分析仪的基本原理。由于该方法仪器结构复杂, 用途单一, 分析时间较长等缺点限制了其推广和应用。
近年来, 越来越多的氨基酸分析方法被应用于各个领域[ 5~ 8] 。但是, 随着氨基酸衍生试剂的不断推陈出新, 柱前衍生- 反相色谱分离- 紫外或荧光检测的氨基酸分析方法越来越受到分析工作者的重视[ 9, 10] 。在这些方法中, A ccQ Tag 衍生氨基酸分析方法最为简单且灵敏度高, 重现性好。但是由于受专利保护, 该方法采用专用色谱柱、衍生试剂和流动相来分析氨基酸, 加之该专用色谱柱填料是早期硅胶, 实际应用过程柱寿命较短, 造成运行成本极高。
本实验采用A ccQ Tag 衍生试剂对氨基酸衍生后, 使用实验室常用流动相和常规C18柱分离,紫外检测, 17种氨基酸在32 m in内完全分离, 在保证高灵敏度的同时缩短了分析时间, 简化了流动相组成,大幅降低了分析成本, 提高了分析速度。
近年来, 越来越多的氨基酸分析方法被应用于各个领域[ 5~ 8] 。但是, 随着氨基酸衍生试剂的不断推陈出新, 柱前衍生- 反相色谱分离- 紫外或荧光检测的氨基酸分析方法越来越受到分析工作者的重视[ 9, 10] 。在这些方法中, A ccQ Tag 衍生氨基酸分析方法最为简单且灵敏度高, 重现性好。但是由于受专利保护, 该方法采用专用色谱柱、衍生试剂和流动相来分析氨基酸, 加之该专用色谱柱填料是早期硅胶, 实际应用过程柱寿命较短, 造成运行成本极高。
本实验采用A ccQ Tag 衍生试剂对氨基酸衍生后, 使用实验室常用流动相和常规C18柱分离,紫外检测, 17种氨基酸在32 m in内完全分离, 在保证高灵敏度的同时缩短了分析时间, 简化了流动相组成,大幅降低了分析成本, 提高了分析速度。
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