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关键词：
直接衍生,溶剂萃取,高效液相色谱法,羰基化合物,水基胶
发表时间：
2012-02-21 10:49:44
液相色谱_串联质谱法测定水稻中生长素及其氨基酸结合物
崔恒彬 | -> | 1144| 8| 0.557474MB |液相色谱－串联质谱,生长素,氨基酸结合物,水稻
摘要: 建立了同时测定水稻中吲哚-3-丁酸(IBA)、吲哚-3-乙酸(IAA) 及其7 种氨基酸结合物的液相色谱－串联质谱(HPLC － MS /MS)检测方法。样品在4 ℃下于80%甲醇中浸提12 h 后，经混合阴离子交换反相固相萃取(MAX)净化，以5 mmol /L 的甲酸铵溶液和甲醇为流动相，在C18柱上进行液相色谱分离，电喷雾正离子模式下用三重四极杆质谱仪多反应监测方式测定。对水稻根、茎、叶和籽粒4 种基质分别进行加标回收实验，9 种分析物的平均加标回收率为75% ～ 106%，RSD 为3. 6% ～ 15. 2%，方法检出限( S /N = 3) 为0. 01 ～25 μg /kg。方法准确、灵敏，能满足水稻中9 种生长素及其结合物在其生理水平的测定。
生长素在植物生长发育过程中起着至关重要的调控作用，其参与了从胚胎发育、原基形成到果实
成熟等各个过程［1 － 2］，甚至严重影响水稻等重要农作物的产量［3 － 4］。天然生长素主要是吲哚类衍生物，主要以游离态的吲哚-3-乙酸(IAA) 为活性形式发挥生理作用。然而在植物体内，IAA 因经历复杂的代谢、转化等过程，主要以结合态或修饰态存在，如其中较为重要的一类是IAA 的氨基酸结合物［5 － 6］。这些结合物虽不具生理活性，但参与了IAA 的长距离运输，并作为其储存载体而维持植株体内游离IAA 的动态平衡［7 － 8］，甚至可能与环境胁迫信号的应答关系密切［9］。因此，准确测定生长素及其主要结合物的水平，可为研究植株体内的活性生长素水平在时间和空间上的自我调控机理及其与外界胁迫因子应答关系起到重要的推动作用。
目前，有关生长素的测定方法中，国内主要是关于游离IAA、吲哚-3-丁酸( IBA) 等的测定［10 － 14］，很少涉及其氨基酸结合物。而国外已有相关报道，如Tam 等［15］采用GC － MS 法测定了IAA － Asp 等4种IAA 氨基酸结合物，但由于IAA 的氨基酸结合物均为水溶性的强极性物质，GC － MS 法通常采用强碱水解、甲基化或三甲基硅烷化等衍生化处理，再结合多步净化法进行测定，过程相对复杂且不适合高通量分析［16 － 17］。LC － MS /MS 技术具有高选择性、高灵敏度的优点，尤其对较强极性物质的分析能力较GC － MS 法具有明显优势，适合分析生长素及其氨基酸结合物［18 － 21］，Kojima 等［21］采用HLB 串联混合阳离子交换反相固相萃取(MCX)净化，LC － MS /MS 法测定了水稻中IAA － Ala、IAA － Leu 等7 种氨基酸结合物。本文以80%甲醇－ 水溶液为提取溶剂，首次采用MAX 净化，建立了LC － MS /MS 法同时测定水稻中9 种生长素及其氨基酸结合物的分析方法。该方法快速、灵敏，能满足水稻中9 种生长素及其结合物在其生理水平的测定。
成熟等各个过程［1 － 2］，甚至严重影响水稻等重要农作物的产量［3 － 4］。天然生长素主要是吲哚类衍生物，主要以游离态的吲哚-3-乙酸(IAA) 为活性形式发挥生理作用。然而在植物体内，IAA 因经历复杂的代谢、转化等过程，主要以结合态或修饰态存在，如其中较为重要的一类是IAA 的氨基酸结合物［5 － 6］。这些结合物虽不具生理活性，但参与了IAA 的长距离运输，并作为其储存载体而维持植株体内游离IAA 的动态平衡［7 － 8］，甚至可能与环境胁迫信号的应答关系密切［9］。因此，准确测定生长素及其主要结合物的水平，可为研究植株体内的活性生长素水平在时间和空间上的自我调控机理及其与外界胁迫因子应答关系起到重要的推动作用。
目前，有关生长素的测定方法中，国内主要是关于游离IAA、吲哚-3-丁酸( IBA) 等的测定［10 － 14］，很少涉及其氨基酸结合物。而国外已有相关报道，如Tam 等［15］采用GC － MS 法测定了IAA － Asp 等4种IAA 氨基酸结合物，但由于IAA 的氨基酸结合物均为水溶性的强极性物质，GC － MS 法通常采用强碱水解、甲基化或三甲基硅烷化等衍生化处理，再结合多步净化法进行测定，过程相对复杂且不适合高通量分析［16 － 17］。LC － MS /MS 技术具有高选择性、高灵敏度的优点，尤其对较强极性物质的分析能力较GC － MS 法具有明显优势，适合分析生长素及其氨基酸结合物［18 － 21］，Kojima 等［21］采用HLB 串联混合阳离子交换反相固相萃取(MCX)净化，LC － MS /MS 法测定了水稻中IAA － Ala、IAA － Leu 等7 种氨基酸结合物。本文以80%甲醇－ 水溶液为提取溶剂，首次采用MAX 净化，建立了LC － MS /MS 法同时测定水稻中9 种生长素及其氨基酸结合物的分析方法。该方法快速、灵敏，能满足水稻中9 种生长素及其结合物在其生理水平的测定。
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