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关键词：
直接衍生,溶剂萃取,高效液相色谱法,羰基化合物,水基胶
发表时间：
2012-02-21 10:49:44
摘要: 建立了高效液相色谱－ 游离酪氨酸法鉴定高蛋白含量辐照食品的方法。向经过辐照的高蛋白含量样品中加入0. 1 mol /L HCl，使细胞裂解并释放出游离酪氨酸，离心除去细胞碎片后，向上清液中加入80% 丙酮并在－ 20 ℃下冰冻沉淀除去大部分蛋白，样品中的酪氨酸与三氟乙酸形成离子对后经C18色谱柱分离。在100 ～ 1 500 μg /L 质量浓度范围内，邻酪氨酸和间酪氨酸均具有良好线性，方法的回收率为61%～ 116%，定量下限(S /N≥10)为10 μg /L。该法避免了蛋白质的水解，具有操作简便、测定准确等优点，能很好地区分未经辐照与经5 kGy 以上剂量辐照的食品。
食品辐照是用射线照射食品以达到杀虫、杀菌和延长保质期等目的的技术。1980 年在日内瓦召开的辐射食品安全卫生性问题国际会议从辐射化学、营养学、微生物学、毒理学方面确认了辐照食品的安全性［1］。目前辐照食品常用的检测方法有基于测量食品硬组织在辐照后形成长寿自由基的电子自旋共振法［2］和测量食品中硅酸盐在辐照后形成高能电子的热释光法［3 － 4］，以及2-烷基环丁酮法［5］、挥发性碳氢化合物法［6］、微生物筛选法［7］、光释光法［8］等，欧盟也颁布了辐照食品的标准检测方法［9 － 13］。
通过辐照，高蛋白含量食品中的游离苯丙氨酸( 图1)或蛋白质中的苯丙氨酸残基会转变为酪氨酸(包括邻酪氨酸、间酪氨酸和对酪氨酸，结构式见图1)，且生成的酪氨酸与辐照剂量在较大的范围内成正比。由于基体本体中通常含有大量的对酪氨酸，而间酪氨酸和对酪氨酸极性相似较难分离，因此通常选用邻酪氨酸作为辐照食品的标记物。传统的酪氨酸法通过用盐酸高温隔夜水解样品中的蛋白，并采用高效液相色谱法对水解释放的酪氨酸进行分离测定［14 － 16］。但通常酸水解产生的基底复杂，难分离，且方法耗时长、重现性差［17］。
本文采用0. 1 mol /L 的盐酸使细胞裂解，向其中加入约80%丙酮，在－ 20 ℃沉淀除去大部分蛋白，以三氟乙酸作为离子对试剂，通过C18色谱柱/荧光检测分离测定游离苯丙氨酸生成的邻酪氨酸和间酪氨酸，能很好地区分高蛋白含量食品是否经过5 kGy 及以上剂量的辐照，从而建立了高效液相色谱－游离酪氨酸法鉴定高蛋白含量辐照食品的分析方法。该方法避免了高温酸水解，具有快速、准确、灵敏、抗干扰能力强的特点，适用于高蛋白含量辐照食品的检测鉴定。
通过辐照，高蛋白含量食品中的游离苯丙氨酸( 图1)或蛋白质中的苯丙氨酸残基会转变为酪氨酸(包括邻酪氨酸、间酪氨酸和对酪氨酸，结构式见图1)，且生成的酪氨酸与辐照剂量在较大的范围内成正比。由于基体本体中通常含有大量的对酪氨酸，而间酪氨酸和对酪氨酸极性相似较难分离，因此通常选用邻酪氨酸作为辐照食品的标记物。传统的酪氨酸法通过用盐酸高温隔夜水解样品中的蛋白，并采用高效液相色谱法对水解释放的酪氨酸进行分离测定［14 － 16］。但通常酸水解产生的基底复杂，难分离，且方法耗时长、重现性差［17］。
本文采用0. 1 mol /L 的盐酸使细胞裂解，向其中加入约80%丙酮，在－ 20 ℃沉淀除去大部分蛋白，以三氟乙酸作为离子对试剂，通过C18色谱柱/荧光检测分离测定游离苯丙氨酸生成的邻酪氨酸和间酪氨酸，能很好地区分高蛋白含量食品是否经过5 kGy 及以上剂量的辐照，从而建立了高效液相色谱－游离酪氨酸法鉴定高蛋白含量辐照食品的分析方法。该方法避免了高温酸水解，具有快速、准确、灵敏、抗干扰能力强的特点，适用于高蛋白含量辐照食品的检测鉴定。
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