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关键词：
分散,健康,体中,生物,等效,
发表时间：
2011-01-07 10:39:19
柱前衍生化RP_HPLC测定米格列奈钙光学纯度
摘要：目的建立柱前衍生化-反相高效液相色谱法测定S-米格列奈钙的光学纯度。方法采用手性衍生化试剂S-萘乙胺(S-NEA)，以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC•HCl)和1-羟基苯并三唑(HOBt)为偶联剂对样品S-米格列奈钙进行衍生化。衍生产物以乙腈-0.01mol•L-1磷酸二氢钾缓冲液(pH2.5)(50∶50)为流动相，在AgilentZorbaxC18(250mm×4.6mm，5µm)色谱柱上进行分离，流速为1.5mL•min-1，检测波长为225nm，柱温为30℃。结果R-米格列奈在0.3~3.0μg•mL-1内线性关系良好，检测限和最低定量下限分别0.1和0.3μg•mL-1，平均回收率为102.4%，日内日间精密度考察中RSD均小于5%。结论该方法灵敏度高，衍生化产物稳定，重复性好，可用于S-米格列奈钙光学杂质的检测。关键词：米格列奈钙；光学纯度；高效液相色谱法；柱前衍生化
米格列奈钙(mitiglinidecalcium)是由日本桔生公司(kisses)研制的一种新型2型糖尿病治疗药物。临床上以S型给药，因此需要对其R型异构体进行控制。邢玉仁[1]和吉同琴等[2]分别报道了使用SumichiralOA手性柱拆分米格列奈对映体。但在本实验室重现这些方法时发现，由于米格列奈具有末端吸收的特点，无论采用报道的正相模式(正己烷、甲醇、三氟乙酸和氯仿混合体系)还是反相模式(乙腈、甲醇和醋酸铵混合体系)，均对于样品中含有的微量异构体(特别是小于0.3%时)无法有效分离。手性试剂柱前衍生化技术是手性药物分析的常用手段之一，优良的手性试剂不仅可以将对映体转变成能良好分离的非对映体对衍生物，还可以使衍生物具有良好的可检测性[3]。Sigma公司已有商品化的高光学纯度的S-萘乙胺(S-NEA)出售，它可以为衍生化产物引入萘环结构从而大大提高检测灵敏度，常用于羧酸类手性药物的拆分研究[4-5]。本试验对米格列奈钙的衍生化反应条件进行了优化，考察了分析方法学，并对实际样品进行了测定。结果表明该方法适用于S-米格列奈钙中的微量R型光学杂质检测。
仪器Waters液相色谱仪(配备UV检测器)，Empower色谱工作站。1.2药品与试剂米格列奈钙样品由浙江华海药业股份有限公司提供；S-米格列奈钙(批号：060501，纯度：≥99.0%)及其异构体对照品(批号：060501，纯度≥99.0%)由上海医药工业研究院提供；1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基-碳酰亚胺盐酸盐(EDC•HCl，批号：1251845，纯度≥99.0%)和S-NEA(ChiralSelect，批号：S27216-165，光学纯度≥99.5%)购自美国Sigma公司；1-羟基-苯并-三氮唑(HOBt，批号：L290F04，纯度≥97.0%)购自美国B&J公司；乙腈、甲醇、磷酸二氢钾、浓磷酸均为色谱纯；水为Milli-Q超纯水。
色谱条件色谱柱：AgilentZorbaxC18(250mm×4.6mm，5µm)；流动相：乙腈-0.01mol•L-1磷酸二氢钾缓冲液(用浓磷酸调pH值至2.5)(50∶50)；流速：1.5mL•min-1；检测波长：225nm；进样量：20µL；柱温：30℃。
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