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关键词：
高效液相色谱法,色氨酸,犬尿氨酸,5-羟吲哚乙酸,犬尿喹啉酸,血浆
发表时间：
2013-11-21 14:50:09
在线衍生_高效液相色谱法同时测定血浆中的色氨酸及其代谢物
王华 | -> | 676| 1| 0.737067MB |高效液相色谱法,色氨酸,犬尿氨酸,5-羟吲哚乙酸,犬尿喹啉酸,血浆
摘要: 建立了醋酸锌在线衍生高效液相色谱法同时测定血浆中色氨酸( Trp) 、犬尿氨酸( Kyn) 、5-羟吲哚乙酸( 5-Hiaa) 和犬尿喹啉酸( Kyna) 的方法。以3-硝基酪氨酸为内标( IS) ，采用Hypersil C-18 柱( 250 mm × 4. 0 mm，5μm) ，以250 mmol /L 醋酸锌溶液( pH 5. 5) -乙腈( 95∶ 5，v /v) 为流动相，流速为0. 8 mL/min，柱温30 ℃。荧光检测波长设定: 5-Hiaa 为278 nm( λex) /343 nm( λem) ，Kyna 为244 nm( λex) /400 nm( λem) ; 紫外检测波长设定: Kyn 和IS为360 nm，Trp 为302 nm。4 种物质的回收率在91. 62% ～ 114. 17% 之间; 线性范围分别为2. 50 ～ 320. 00 μmol /L( Trp) ，0. 32 ～ 15. 36 μmol /L( Kyn) ，3. 27 ～ 104. 60 nmol /L( 5-Hiaa) ，14. 00 ～ 464. 80 nmol /L( Kyna) ; 检出限分别为0. 078 μmol /L( Trp) ，0. 056 μmol /L( Kyn) ，0. 690 nmol /L( 5-Hiaa) ，1. 290 nmol /L( Kyna) 。利用该方法对30 例正常孕妇和28 例女性健康志愿者的血浆进行测定，结果表明两组间Trp，Kyn 和Kyna 含量有显著性差异。该方法操作简便，重复性好，灵敏度高，适合于临床检测。
色氨酸( tryptophan，Trp) 作为人体内的一种必需氨基酸，不仅可合成蛋白质，还能在不同组织中代谢为多种生物活性分子。在脑中Trp 主要通过色氨酸羟化酶( TPH) 的作用生成5-羟色胺，5-羟色胺在单胺氧化酶的作用下转化为5-羟吲哚乙酸( 5-hydroxyindole acetic acid，5-Hiaa) ; 在脑外Trp 主要经色氨酸-2，3-双加氧酶( TDO) 或吲哚胺-2，3-双加氧酶( IDO) 的作用生成甲酰犬尿氨酸，甲酰犬尿氨酸经犬尿氨酸甲酰胺酶代谢为犬尿氨酸( kynurenine，Kyn) ，Kyn 通过犬尿氨酸氨基转移酶的作用代谢为犬尿喹啉酸( kynurenic acid，Kyna) ［1］。肿瘤、肾衰竭、感染性疾病、神经性疾病等均存在色氨酸代谢紊乱［2 － 7］。Kyn /Trp 可间接反映IDO 活性和细胞免疫状态［8］。色氨酸及其代谢物的分析方法常用高效液相色谱法( HPLC) : 其中Trp 和Kyn 采用紫外检测［9 － 12］，Kyna 采用荧光检测［13， 14］，而5-Hiaa则用荧光或电化学检测［15 － 17］。目前尚未检索到同时测定血浆Trp、Kyn、Kyna 和5-Hiaa 的方法。本研究采用醋酸锌在线衍生及程序波长的高效液相色谱技术同时分离和测定Trp 及其3 种代谢物，利用3-硝基酪氨酸( 3-nitrotyrosine，3-N-Tyr) 为内标( IS) 定量，提高了分析的可靠性和准确性。该方法操作简便，快速，灵敏，成功应用于孕妇血浆中Trp 的代谢分析。
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