柴油降解菌的筛选鉴定及降解特性研究

摘要：以柴油为唯一碳源，在富集、驯化培养基础上，从胜利油田石油污染土壤中筛选出一株柴油降解微生物WS14，通过外观形貌、Biolog 鉴定等生理生化分析以及16S rRNA 基因序列分析，确定该微生物为不动杆菌属（Acinetobacter sp.）。通过对筛选到柴油降解菌的生长因子研究发现：适合WS14 菌株生长的最佳pH 值为6.0~8.5，适宜温度为35 ℃，最佳培养时间为72 h，并且柴油含量为11.5%时菌株的生长量最大；实验结果显示，WS14 菌株对高盐和高含量柴油具有一定的耐受性，能够在5%含盐量和30%柴油含量的环境生长。

    柴油是一种非常重要的石油产品，预计2011 年我国的柴油产量将达到每天3 000 万桶。随着柴油产量和需求的不断提高，冶炼、储存、运输等环节泄漏所造成的水体、土壤和大气等环境污染相应突出[1]，并且油类污染物具有致癌、致畸、致突变等作用，易于在生物体内富集，严重危害和影响生态系统及人体健康[2]。在自然环境中微生物分布广、数量多、具有较强的适应和突变能力，研究表明，环境中存在许多以石油类污染物为唯一碳源的微生物[3-4]，水体和土壤等介质中石油类污染物能够快速、有效地被微生物降解去除[5-7]。与物理、化学法相比，生物法修复石油
污染土壤具有安全性好、无二次污染、易于管理等优点，因此，环境污染的生物修复技术日益受到国内外环保专家的重视。
    柴油在环境中的迁移、转化等环境行为受到物理、化学和生物等诸多因素的影响。目前国内外对于微生物降解石油类污染物方面进行了很多的研究[8-9]，在这些研究中驯化和筛选能够高效降解石油类污染物的菌株是生物修复技术的关键和难点。Mukherji 等人从海底沉积物中筛选出能够耐受3.5%含盐量的菌株，在好氧条件下8 d 能够降解30%的柴油污染物[10]。由于石油类污染物的疏水性，生物表面活性剂用于促进微生物降解石油烃成为研究热点[11-12]。近年来，研究发现微生物在寒冷、盐碱、厌氧等不利环境条件下也能降解柴油[13-15]。庄铁诚和林鹏在红树林土壤中筛选出10 株柴油降解优势细菌类群，其在柴油含量为1%的污染土壤中，7 d 后柴油的去除率达75%[16]。袁红莉等[17]以及Potter 和Duval[18]筛选出石油高效降解菌，对难生物降解沥青质组分的最高去除率分别为53%和40%。
    本研究针对胜利油田油泥污染土壤盐含量和石油类污染浓度高的特点，通过富集、驯化筛选出高效柴油降解菌，经过pH 值、温度、柴油浓度和培养时间的条件实验，得出高效柴油降解菌株的最佳生长条件，了解高效柴油降解菌株的生物降解规律和修复潜力。