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关键词：
拉曼散射,分子结构,斯托克斯参量
发表时间：
2012-02-16 11:08:58
可见光谱法测定GA_HRP_H_2O_2体系的活化能
王立新 | -> | 825| 0| 0.459948MB |可见光谱,过氧化物酶,循环催化流动分析,活化能,指前因子,阿仑尼乌斯公式
摘 要 活化能( Ea) 是反应中一个重要的物理量, 与反应速度直接相关, 因此本实验计划利用一个新
的循环催化流动分析方法( RCFA) , 测定愈创木酚( GA) -HRP-H2O2 反应体系的活化能。RCFA 系统为循环回路, 人为干扰因素小, 能够对酶催化过程实现连续检测, 得到的测定结果准确度高。使用RCFA 系统在可见光谱下测定得到GA-HRP-H2O2 体系完整动力学曲线, 由此求解得到酶催化反应表观速率常数( k) , 最后利用阿仑尼乌斯公式求得该催化反应体系的活化能( Ea ) = 53. 46±0. 097kJ·mo l- 1, 指前因子( A E ) = 2. 5×103 ±0. 099min- 1; Ea 与AE 的相对标准偏差分别为0. 18%和3. 81%, 结果表明在一级反应阶段的不同区段中HRP 催化反应的活化能和指前因子均为常数。
的循环催化流动分析方法( RCFA) , 测定愈创木酚( GA) -HRP-H2O2 反应体系的活化能。RCFA 系统为循环回路, 人为干扰因素小, 能够对酶催化过程实现连续检测, 得到的测定结果准确度高。使用RCFA 系统在可见光谱下测定得到GA-HRP-H2O2 体系完整动力学曲线, 由此求解得到酶催化反应表观速率常数( k) , 最后利用阿仑尼乌斯公式求得该催化反应体系的活化能( Ea ) = 53. 46±0. 097kJ·mo l- 1, 指前因子( A E ) = 2. 5×103 ±0. 099min- 1; Ea 与AE 的相对标准偏差分别为0. 18%和3. 81%, 结果表明在一级反应阶段的不同区段中HRP 催化反应的活化能和指前因子均为常数。
活化能表示化学反应中自由分子变成活化分子所需的最低能量[ 1] , 是各种化学反应的重要参
数指标[ 2, 3] 。酶催化反应中活化能则表示酶与底物在自由状态下的势能与二者形成的活化分子的势能之差, 是影响酶催化反应速率的一个重要的物理量[ 4, 5] 。但是在酶学性质的研究中, 前人主要对酶的活性[ 6] 及米氏常数[ 7—9] 进行了测定, 而对酶分子催化下反应体系的活化能研究较少[ 10] 。在活化能的测定中, 主要应用手工法, 操作过程繁琐, 并且难免带入人为误差而使测定结果不准确, 因此需要开发一种能够准确测定酶活性, 并可用于酶学性质研究的方法。
循环催化流动分析方法( Recirculat ing Catalysis Flow Analysis, RCFA ) 是将流经检测器的反应液再回流入反应池中而实现反应液循环使用及检测的方法。RCFA 法能对酶催化反应进行全程监测, 得到详细的酶催化反应数据; RCFA 法测定体系为循环回路, 测定中人为干扰因素少, 测定结果
准确度高; 反应液的循环使用, 节省了大量的昂贵酶试剂; 因此, RCFA 法非常适用于酶的性质研究。基于RCFA 法, 李永生研究团队[ 11] 利用邻苯二胺-辣根过氧化物酶( HRP) -H2O2 反应体系已初
步研究了HRP 的活性。
本文基于RCFA 法, 研究了HRP 催化下愈创木酚( GA) -H2O2 反应体系的活化能。在用RCFA法得到HRP 分子催化GA-H2O2 反应体系在不同反应温度下的动力学曲线后, 依据反应速率与活化能的关系对HRP 催化下GA-H2O2 反应体系的活化能进行了计算。
数指标[ 2, 3] 。酶催化反应中活化能则表示酶与底物在自由状态下的势能与二者形成的活化分子的势能之差, 是影响酶催化反应速率的一个重要的物理量[ 4, 5] 。但是在酶学性质的研究中, 前人主要对酶的活性[ 6] 及米氏常数[ 7—9] 进行了测定, 而对酶分子催化下反应体系的活化能研究较少[ 10] 。在活化能的测定中, 主要应用手工法, 操作过程繁琐, 并且难免带入人为误差而使测定结果不准确, 因此需要开发一种能够准确测定酶活性, 并可用于酶学性质研究的方法。
循环催化流动分析方法( Recirculat ing Catalysis Flow Analysis, RCFA ) 是将流经检测器的反应液再回流入反应池中而实现反应液循环使用及检测的方法。RCFA 法能对酶催化反应进行全程监测, 得到详细的酶催化反应数据; RCFA 法测定体系为循环回路, 测定中人为干扰因素少, 测定结果
准确度高; 反应液的循环使用, 节省了大量的昂贵酶试剂; 因此, RCFA 法非常适用于酶的性质研究。基于RCFA 法, 李永生研究团队[ 11] 利用邻苯二胺-辣根过氧化物酶( HRP) -H2O2 反应体系已初
步研究了HRP 的活性。
本文基于RCFA 法, 研究了HRP 催化下愈创木酚( GA) -H2O2 反应体系的活化能。在用RCFA法得到HRP 分子催化GA-H2O2 反应体系在不同反应温度下的动力学曲线后, 依据反应速率与活化能的关系对HRP 催化下GA-H2O2 反应体系的活化能进行了计算。
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