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关键词：
基础酶联免疫吸附法,血清巨噬细胞因子1,分光光度法
发表时间：
2011-11-25 11:15:33
用分光光度法定量检测人血清巨噬细胞抑制因子1
岳擎宇 | -> | 1251| 0| 0.309524MB |基础酶联免疫吸附法,血清巨噬细胞因子1,分光光度法
摘 要 结合基础酶联免疫吸附技术( ELISA) , 用分光光度法检测人血清中的巨噬细胞抑制因子1(MIC-1) 的浓度。通过免疫反应将待测物质衍生化, 生成可见光区可检测的复合物。在450nm 波长处用分光光度法测定该复合物的吸光度, 绘制MIC-1 浓度-吸光度校准曲线, 方程式为y = 2. 375- 2. 378/ ( 1+0. 001x ) 0. 938 ( r = 0. 999) 。根据样本的吸光度推算血清MIC-1 的浓度。方法的线性范围为15. 625—500. 000pg/ m L。回收率为98. 2%—101. 6%, 相对标准偏差为1. 89%—5. 10%。
巨噬细胞抑制因子1( Macrophag e Inhibitory Factor -1, MIC-1) , 是转化生长因子超家族中的一个分支成员[ 1] 。在炎症、肿瘤、损伤等病理状态下, MIC-1 作为一种应激反应蛋白, 由脂多糖、前炎症因子等激活巨噬细胞产生, 参与调控机体内多种细胞功能和生物过程, 发挥广泛的保护调节作用, 如: 抗器官功能损害, 抗炎性反应, 促进肿瘤细胞凋亡, 抑制肿瘤细胞生长, 营养神经元等[ 2] 。
现已发现MIC-1 与人体多种恶性肿瘤, 如前列腺癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、胃癌等密切相
关[ 3— 5] , 它可作为一种独立于传统标志物的恶性肿瘤新指标, 用于恶性肿瘤的防治及预后评估。此外, 相关研究还证实MIC-1 也与心血管疾病相关。作为一种重要的心脏应激保护因子, 它是妇女患动脉粥样硬化等心血管事件的独立危险因素[ 6] 。最新研究报道, 脂肪细胞也能分泌MIC-1, 并通过作用于下丘脑中枢抑制食欲, 减轻体重, 参与人体能量平衡的调节[ 7] , 它可能还与肥胖等代谢性疾病相关。因此, 准确地检测人血清MIC-1 浓度对于恶性肿瘤、心血管疾病、代谢性疾病等的防治及预后具有重要的临床和科研价值。
目前, 国际上检测血清MIC-1 浓度的方法主要有基础酶联免疫吸附法( ELISA) 双抗体夹心法[ 3] 和放射免疫法( RIA) [ 8] 。由于RIA 法需要特殊仪器, 且存在放射危害、试剂的污染和有效期等问题, 逐步被ELISA 法取代。而至今尚无ELISA 定量检测人血清MIC-1 浓度的方法报道。本研究
将分光光度法运用于ELISA 中, 建立了准确、可靠且稳定的定量检测血清MIC-1 浓度的方法。并将该方法运用于临床研究, 了解2 型糖尿病患者体内血清MIC-1 的水平特征。
现已发现MIC-1 与人体多种恶性肿瘤, 如前列腺癌、结肠癌、直肠癌、胰腺癌、胃癌等密切相
关[ 3— 5] , 它可作为一种独立于传统标志物的恶性肿瘤新指标, 用于恶性肿瘤的防治及预后评估。此外, 相关研究还证实MIC-1 也与心血管疾病相关。作为一种重要的心脏应激保护因子, 它是妇女患动脉粥样硬化等心血管事件的独立危险因素[ 6] 。最新研究报道, 脂肪细胞也能分泌MIC-1, 并通过作用于下丘脑中枢抑制食欲, 减轻体重, 参与人体能量平衡的调节[ 7] , 它可能还与肥胖等代谢性疾病相关。因此, 准确地检测人血清MIC-1 浓度对于恶性肿瘤、心血管疾病、代谢性疾病等的防治及预后具有重要的临床和科研价值。
目前, 国际上检测血清MIC-1 浓度的方法主要有基础酶联免疫吸附法( ELISA) 双抗体夹心法[ 3] 和放射免疫法( RIA) [ 8] 。由于RIA 法需要特殊仪器, 且存在放射危害、试剂的污染和有效期等问题, 逐步被ELISA 法取代。而至今尚无ELISA 定量检测人血清MIC-1 浓度的方法报道。本研究
将分光光度法运用于ELISA 中, 建立了准确、可靠且稳定的定量检测血清MIC-1 浓度的方法。并将该方法运用于临床研究, 了解2 型糖尿病患者体内血清MIC-1 的水平特征。
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