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柱前衍生化HPLC 分析蒲公英多糖的单糖组成

王应平 | -> | 1000| 6| 0.795673MB |柱前衍生化,高效液相色谱法,单糖,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮

王应平 王应平 | 文档量 |浏览量12800

摘要:目的 合理优化衍生方法测定蒲公英多糖中单糖的组成及摩尔比。方法 采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生,用反相高效液相色谱法进行测定。色谱条件为:ZORBAX-C18 柱;流动相:0.1 mol·L−1 的磷酸盐缓冲液(pH 6.7)-乙腈(83∶17);流速:1 mL·min−1;检测波长:245 nm;进样量:20 μL;柱温:室温。结果 蒲公英多糖由D-鼠李糖、葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖和D-阿拉伯糖组成,以不同方法提取的各单糖含量的摩尔比为:水提取法,Rha∶Glc∶Gal∶Ara=0.088∶0.500∶0.190∶0.340;超声提取法,Rha∶Glc∶Gal∶Ara=0.050∶0.350∶0.080∶0.320;酶提取法,Rha∶Glc∶
Gal∶Ara=0.270∶0.630∶0.330∶0.460;超声协提取同酶法,Rha∶Glc∶Gal∶Ara =0.078∶0.550∶0.130∶0.170。结论 改进后的衍生化方法和等度洗脱的色谱方法具有操作简单、快速、重复性好等特点,可用于蒲公英多糖中单糖组成和摩尔比的测定。
    蒲公英为菊科蒲公英属多年生草本植物,现在的研究表明蒲公英的化学成分不仅有挥发油、
黄酮类、三萜类、香豆精类和倍半萜内酯类,而且富含甾醇、棕榈酸和多糖[1]。近年来,蒲公英的化学成分和药理作用已得到深入研究,但是关于蒲公英多糖的单糖组成却鲜有报道,而多糖的单
糖组成分析是进行多糖质量控制和获取多糖基本信息的重要环节。本试验采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生,通过对衍生条件的合理优化,进行高效液相色谱法测定单糖的组成;在测定中对高效液相色谱法也进行了适当简化,改变以往的梯度洗脱[2-5],而采用等度洗脱方法,测定了4 种提取方法得到的多糖中单糖的摩尔比。
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