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乙草胺人工抗原的合成及其单克隆抗体的制备

蒋虹 | -> | 676| 0| 0.386195MB |乙草胺,半抗原,人工抗原,单克隆抗体

蒋虹 蒋虹 | 文档量 |浏览量12072

摘 要: 通过乙草胺与3-巯基丙酸在碱性条件下反应合成了半抗原) ) ) 乙草胺-巯基丙酸( AM PA )。采用活性酯法将半抗原AM PA 分别与牛血清白蛋白( BSA )和卵清蛋白( OVA )偶联制备了人工抗原。通过紫外光谱测定了AM PA 与B SA 及OVA 间的分子结合比分别为41和26。用AM PA-B SA 免疫小鼠, 制备得到的单克隆抗体的效价为1B16 @ 104。以AMPA-OVA 作包被抗原,用乙草胺单克隆抗体建立了ELISA 检测方法, IC50值为0. 55 Lg /L, 方法的检测范围为0. 04 ~5 Lg /L, 检测限为0. 04 Lg /L。
    乙草胺( Ñ )是一种优秀的选择性芽前酰胺类除草剂, 但由于乙草胺及其代谢产物醌亚胺具有
致癌作用, 已被美国环境保护局定为B-2 类致癌物[ 1] 。2005年日本检疫站在对中国产松菇进行检查过程中, 连续两次发现松菇中的乙草胺残留超过其实施的/ 一律标准0 0. 01 mg /kg, 严重影响了我国的进出口贸易。因此有必要建立简便易行的乙草胺残留的检测方法。目前, 国内外乙草胺的残留检测主要依靠理化检验方法, 即气相色谱和GC-M S法, 但其样品前处理复杂、繁琐费时。免疫学分析方法由于具有灵敏、快速、特异、简便等优点倍受欢迎。国外对乙草胺残留的免疫学检测研究是先合成乙草胺半抗原和免疫原[ 2] (见图1、2) , 再用免疫原免疫动物获得针对乙草胺的抗体而建立免疫检测方法, 但国外的研究报道只限于乙草胺多克隆抗体的制备[3,4 ] , 有关乙草胺单克隆抗体的制备及其残留免疫学分析方法尚未见报道。作者参照文献[ 2] 的方法合成了乙草胺人工抗原, 制备了乙草胺单克隆抗体, 旨在为乙草胺残留检测的酶联免疫分析方法( EL ISA )和免疫亲和色谱( IAC )方法的建立奠定基础。
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