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不同浓度甲醛致大鼠肝细胞DNA氧化损伤作用

吴冰 | -> | 945| 0| 274.564MB |8-羟基脱氧鸟苷,DNA氧化损伤,大鼠肝细胞悬液,甲醛

吴冰 吴冰 | 文档量 |浏览量26555

摘要: 为了探讨外源性化合物暴露致内脏细胞DNA 氧化损伤程度的定量检测方法, 尝试以8-羟基脱氧鸟苷( 8-hydroxy-2c-deoxyguanos ine, 8-OH dG)为分子生物标志物, 以甲醛为模式外源性化合物, 以丙二醛(m alond ialdehyde, MDA )为参考指标, 应用大鼠肝细胞悬液进行体外染毒实验研究. 同时, 实验设置甲醛染毒的终浓度分别为0、5、15、45Lm ol#L- 1, 在大鼠肝细胞悬液染毒1h 后, 分别测量了肝细胞悬液中的8 - 羟基脱氧鸟苷( 8 - OH dG )和丙二醛(MDA)含量. 研究结果显示, 随着甲醛浓度升高, 大鼠肝细胞中8-OH dG和MDA含量均呈升高趋势(F = 59. 55,p < 0. 01; F = 75. 82, p < 0. 01 ), 高浓度组( 45Lm ol#L- 1 ) 8-OH dG 和MDA 含量与对照组的差异均具有显著性( p < 0. 01 ) , 中浓度组( 15Lm ol#L- 1 )的这种差别也具有显著性( p < 0. 05, p < 0. 01) , 低浓度组( 5Lm ol#L- 1 )的这种差异没有显著性( p > 0. 05 ) . 因此, 8-OH dG 不但可以用于血液和尿液样品的检测, 而且采用本项研究摸索出的前处理方法可以很好地定量测定内脏细胞DNA 氧化损伤的程度.
    大概外源性化合物暴露所致机体内脏细胞氧化损伤的定量检测是环境毒理学要经常研究的一个问题. 国内实验室一般采用丙二醛( ma lond ia ldehyde,MDA )含量和DNA 断裂(单细胞凝胶电泳实验)作为生物标志物对其进行测量. MDA 反映的是脂质的过氧化作用, 不能准确反映外源性化合物对遗传物质DNA 的损伤; 而DNA 断裂虽然可以反映DNA 的氧化损伤, 但实验结果不稳定, 数据的重现性效果差, 同时还受到DNA-DNA 交联和DNA-蛋白质交联的影响. 为了探讨更好地反映外源性化合物暴露致内脏器官细胞氧化损伤程度的定量检测方法, 本实验室以8-OHdG为分子生物标志物进行研究.
    甲醛( forma ldehyde, FA )是一种无色、强嗅、氧化力强的刺激性气体, 是人们日常生活中经常接触的室内污染物. 甲醛污染对人健康影响具有范围广、水平高、持续时间长、毒性大等特点( Y anget al. , 2004) . 因此, 居室低剂量甲醛长时间污染的潜在危害, 已成为倍受公众关注的社会问题之一.同时, 甲醛可导致呼吸道和眼部刺激作用、致敏作用、免疫毒性和各组织器官氧化损伤(WHO,2002) . 研究已证实, 甲醛具有遗传毒性和致突变性, 可作为氧化剂对DNA 分子直接氧化, 形成8-OHdG, 直接引起DNA 点突变( Conaw ay et a l. ,1996) , 进而导致碱基分子间的环化和交联, 使染色体DNA 不能进行正常复制与转录. 因此, 本实验选取甲醛为模式外源性化合物.
     以往对8-OH dG的研究大多集中在血液和尿液样品方面( Toku jiro et al. , 2009; Chi et al. , 2008) , 而对内脏样品的研究却甚少. 由于8-OHdG 的生成被认为是由于过量活性氧自由基( ROS)与DNA 分子反应所致( Simon et al. , 2008) , 而过量ROS同时还可加速脂质过氧化过程并产生大量MDA, 而MDA是机体在清除自由基过程中发生脂质过氧化的最终产物, 也是一种反映机体细胞氧化损伤程度的指标. 因此, 本研究采用液态甲醛体外染毒方法, 以大鼠肝细胞为实验材料, 对8-OHdG所致DNA 氧化损伤及其剂量-效应关系进行研究, 同时分析MDA 含量的变化. 以期探讨更好的能反映内脏细胞氧化损伤的定量检测方法, 并验证8-OH dG 作为氧化损伤分子生物标志物的效果.
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