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关键词：
荧光关联谱,数据处理,微分曲线,估测参数,多荧光组分
发表时间：
2011-12-22 14:28:18
摘 要 基于蛋白质对双嵌吲哚染料具有良好的荧光增强作用, 以新型水溶性吲哚基同型二聚体探针I , 建立了一种灵敏的蛋白质同步荧光分析体系。实验考察了吲哚探针的荧光特征、吲哚探针浓度、缓冲体系p H、盐浓度等参数对体系荧光的影响。在酸性条件下, 蛋白质分子与探针I 发生结合作用, 同步荧光明显增强并向长波方向发生红移, 且同步荧光强度与蛋白质浓度成良好的线性关系。在最优条件下, 牛血清白蛋白BSA的线性响应范围5100 ×10 - 7～2150 ×10 - 5 g ·mL - 1 , 检测限(3σ/ K) 为3 ×10 - 8 g ·mL - 1 ; 测定了血清蛋白BSA 的合成样品, 不同浓度BSA 样品回收率为9816 %～10310 % , 相对标准偏差111 %～119 %; 与蛋白质紫外标准测定法比较, 测定偏差为014 %～319 %。
蛋白质定量测定在生命科学、医学和化学研究中具有十分重要的意义[1 ,2 ] 。蛋白质检测方法有分光光度法[3 ] , 荧光光度法[427 ] 、化学发光法[8 ] 及电化学法[9 ] 。同步荧光光谱法具有灵敏度高、选择性好、谱带简化等优点, 能够有效地减小体系杂散射光的不良影响, 已广泛应用于多组分的同时测定以及生物分子定量测定分析[10-12 ] , 应用前景广阔。目前,在蛋白质分析方面, 采用同步荧光分析法的报道较少[13 ] , 发展潜力良好。
在荧光分析法中, 由于蛋白内源荧光弱, 高灵敏荧光探针的筛选也是影响蛋白质分析的关键因素。吲哚花菁探针是近年来研究发展的新型生物荧光染料[14 ] 。由于吲哚基团具有刚性平面结构, 荧光性能良好, 同时可以作为结合生物大分子的嵌入体, 测定灵敏度高[15 ,16 ] , 目前吲哚菁类聚合探针
发展迅速, 并已在核酸等生物分子分析中得到良好应用[17-19 ] , 发展前景十分广阔。本文研究的二(1-丙磺酸-2-[ 对(N ,N2二甲基胺)-苯乙烯基]-3 ,3-二甲基吲哚菁-5-磺酸) 同型聚合体菁类探针I 是我们新开发的一种性能稳定的长链水溶性吲哚探针, 迄今为止有关该探针的研究尚未见报道, 对其
展开同步荧光分析研究, 对建立新的蛋白质测定技术具有良好的意义。
本文采用新的水溶性吲哚类双嵌探针I , 研究该探针的特征光谱性能, 考察p H 和离子强度等因素影响, 研究该探针与血清蛋白的结合反应, 建立了一种简便, 灵敏、稳定的新型同步荧光检测蛋白质的分析体系, 并用于血清模拟样品的分析测定, 结果良好。
在荧光分析法中, 由于蛋白内源荧光弱, 高灵敏荧光探针的筛选也是影响蛋白质分析的关键因素。吲哚花菁探针是近年来研究发展的新型生物荧光染料[14 ] 。由于吲哚基团具有刚性平面结构, 荧光性能良好, 同时可以作为结合生物大分子的嵌入体, 测定灵敏度高[15 ,16 ] , 目前吲哚菁类聚合探针
发展迅速, 并已在核酸等生物分子分析中得到良好应用[17-19 ] , 发展前景十分广阔。本文研究的二(1-丙磺酸-2-[ 对(N ,N2二甲基胺)-苯乙烯基]-3 ,3-二甲基吲哚菁-5-磺酸) 同型聚合体菁类探针I 是我们新开发的一种性能稳定的长链水溶性吲哚探针, 迄今为止有关该探针的研究尚未见报道, 对其
展开同步荧光分析研究, 对建立新的蛋白质测定技术具有良好的意义。
本文采用新的水溶性吲哚类双嵌探针I , 研究该探针的特征光谱性能, 考察p H 和离子强度等因素影响, 研究该探针与血清蛋白的结合反应, 建立了一种简便, 灵敏、稳定的新型同步荧光检测蛋白质的分析体系, 并用于血清模拟样品的分析测定, 结果良好。
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