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利用链霉素耐药性突变筛选抗菌活性放线菌

马燕 | -> | 725| 0| 0.516796MB |链霉素,耐药性突变,放线菌,活性,大环内酯类抗生素

马燕 马燕 | 文档量 |浏览量7729

摘 要: 利用链霉素耐药性突变, 从天然无抗菌活性或活性微弱的12株放线菌中筛选活性菌株。在链霉素浓度为25 Lg /mL 时共获得99株耐药菌株。通过抑菌活性测定, 发现7株耐药突变菌株的发酵液产生了抑制细菌活性, 其中仅耐药突变株67S-14所产生活性物质的遗传性能稳定。室内抑制真菌活性测定结果表明: 菌株67S-14发酵液对玉米大斑病菌Ex serohilum turcicum、番茄灰霉病菌Bo trytis c inerea 和棉花枯萎病菌Fusa rium oxyspo rum f. sp. va sin fectum 的抑制率较原始菌株N o. 67提高50% 以上。该突变株在菌落形态方面与原始菌株存在较大的差异。D o sko chilova溶剂系统纸层析结果表明, 该活性物质可能为大环内酯类抗生素。HPLC 分析结果表明, 该抗生素可能是突变菌株67S-14产生的代谢产物。
    从自然环境中发现新抗生素有3 条基本途径: 直接从土壤和海洋微生物中分离; 对已知抗生
素的产生菌进行基因改造, 从而使其产生新抗生素; 改变发酵培养条件, 使已知抗生素的产生菌产生新抗生素[ 1 ] 。作为天然抗生素的主要来源之一, 放线菌产生的活性化合物已超过1万个, 占所有微生物活性代谢物的45%, 其中大多是由链霉菌产生的[ 2 ] 。但近年来从放线菌中发现新抗生素的难度越来越大, 究其原因, 一是已知抗生素的分布丰度远高于未知抗生素, 按照常规方法筛选到新抗生素的几率很低; 二是链霉菌在环境中的分布丰度远高于稀有放线菌, 稀有放线菌的分离和培养均存在较大的难度[ 3, 4 ] 。/ 核糖体工程0的概念最早是由O ch i等学者于1996年提出的, 即在微生物中引入能够作用于核糖体的抗生素耐药性突变(如链霉素、庆大霉素等)  从而影响微生物的次生代谢产物[ 5, 6 ] 。该方法首先在提高已知抗生素的产量上取得了成功, 经/核糖体工程0而产生的诱变菌株其抗生素发酵单位最高可以提高数十倍[ 7~ 11 ] 。后来的研究发现, 诱变菌株除了提高抗生素产量以外, 还可以产生其他抗生素[ 12 ~ 15] 。这一发现的意义在于丰富了新抗生素的来源途径,即已知抗生素的产生菌和非抗生素产生菌经过/ 核糖体工程0诱变后均可能产生新的抗生素。
    本项研究根据/ 核糖体工程0的原理, 采用链霉菌对12株未表现明显抑菌活性或活性微弱的放线菌进行抗性诱导突变, 以玉米大斑病菌和蜡状芽孢杆菌为指示菌对其诱变菌株进行了抑菌活性筛选, 获得了一株对细菌和植物病原真菌都具有显著抑菌活性的菌株67S-14, 并对其形态特征和产生的抑菌活性物质进行了初步研究。
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