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关键词：
转基因大豆,变性梯度凝胶电泳,土壤微生物,群落结构
发表时间：
2013-12-12 10:20:02
猪精液酸性N_乙酰_D_氨基葡萄糖苷酶的纯化及性质
梁晓玲 | -> | 720| 0| 1414.655MB |猪精液,酸性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶,纯化,酶学性质
摘 要 以杜洛克猪精液为材料，采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-32阴离子交换柱层析和Sephadex G-100分子筛柱层析纯化，获得纯化倍数为27.64、比活力为1 773.25 U mg-1的酸性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶纯酶制剂. 经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定，纯酶两种亚基相对分子质量分别为129.13×103和62.24×103. 对其酶学性质的研究结果表明，酶的等电点为5.10，最适pH值为5.5，最适温度为60 ℃. 酶在pH 3.6~9.2、温度10 ℃~55 ℃的范围内较稳定. 以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（pNP-NAG）为底物，测得米氏常数Km为0.455 mmol L-1，最大反应速度Vm为17.34μmol L-1 min-1，活化能为41.70 kJ mol-1. 图8 表1 参15
N -乙酰- β - D - 氨基葡萄糖苷酶（N - a c e t yl - β - D -
glucosaminidase，NAGase，EC 3.3.1.52）广泛分布在动物、植物、昆虫和微生物中[1~4]，为细胞内溶酶体水解酶，主要水解糖蛋白、几丁质和多糖等分子内的糖苷键. 兔子精浆[5]和人精子[6]有很高的NAGase活性. 有研究发现，依据母水牛发情末期唾液中NAGase的活性变化来确定排卵时间、进行人工授精，可显著提高产犊率[7]. NAGase可以帮助精子穿越透明带[8]. 当用 NAGase处理小鼠卵子，卵子失去与精子的结合能力[9]，表明精子中的NAGase有可能在受精后，水解卵子表面参与精卵结合的糖蛋白链，从而阻止多精受精. 可见，动物体内的 NAGase与其繁殖机能有一定的相关性. 但是，NAGase在高等动物精卵识别中的作用机理还不清楚，而NAGase的分离纯化是进行相关研究的基础.本试验以猪精液为材料，在分离纯化得到猪精液碱性 NAGase [10]的基础上，应用现代生物化学技术纯化酸性NAGase，研究其理化性质，为进一步探讨猪精液中的NAGase在猪体内的生理功能以及酶活性与精液品质、繁殖机能之间的关系奠定基础.
glucosaminidase，NAGase，EC 3.3.1.52）广泛分布在动物、植物、昆虫和微生物中[1~4]，为细胞内溶酶体水解酶，主要水解糖蛋白、几丁质和多糖等分子内的糖苷键. 兔子精浆[5]和人精子[6]有很高的NAGase活性. 有研究发现，依据母水牛发情末期唾液中NAGase的活性变化来确定排卵时间、进行人工授精，可显著提高产犊率[7]. NAGase可以帮助精子穿越透明带[8]. 当用 NAGase处理小鼠卵子，卵子失去与精子的结合能力[9]，表明精子中的NAGase有可能在受精后，水解卵子表面参与精卵结合的糖蛋白链，从而阻止多精受精. 可见，动物体内的 NAGase与其繁殖机能有一定的相关性. 但是，NAGase在高等动物精卵识别中的作用机理还不清楚，而NAGase的分离纯化是进行相关研究的基础.本试验以猪精液为材料，在分离纯化得到猪精液碱性 NAGase [10]的基础上，应用现代生物化学技术纯化酸性NAGase，研究其理化性质，为进一步探讨猪精液中的NAGase在猪体内的生理功能以及酶活性与精液品质、繁殖机能之间的关系奠定基础.
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