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关键词：
三维电极,电催化,粒子电极,粒子电极串,电位差
发表时间：
2013-03-07 14:18:36
摘要: 构建了具有不同抗性且能够组成型表达绿色荧光蛋白的一系列转座子质粒pTnM od-OCm-G、pTnMod-OTc-G、pTnM od-OKm3-G 和pTnM od-OGm-G, 并通过三亲本杂交的方法, 成功地将荧光蛋白基因分别插入到多环芳烃降解菌株Sphing om onas sp. 12A和P seud om onas sp. 12B 的基因组内, 获得了具有降解多环芳烃特性, 同时在没有抗生素选择压力下连续传代多次仍能够稳定组成型表达荧光的转化子. 结果表明, 该系列转座子不仅适合其它革兰氏阴性菌的遗传标记, 也为进一步研究降解菌在污染环境中的存活能力和生态安全奠定了基础.
实验室条件下, 典型有机污染物的微生物降解能够取得较理想的效果, 然而自然条件下生物修复成功的案例仍较少(Mohan et al. , 2006), 其中一个重要原因是生物强化过程中引入的外源降解微生物在污染环境中受土著微生物、重金属、环境条件变化等因素的影响, 使降解微生物的存活能力和降解活性降低( Tang et al. , 2005; H einaru et al. ,2005) . 同时, 有必要对具有较强存活能力的外源微生物进行生态风险评价, 以防止其对人类健康和生态环境可能带来的不利影响. 因此, 对引入的外源降解菌进行追踪检测就显得十分必要.
绿色荧光蛋白( G reen F luorescent Prote in, GFP)具有无种属特异性、荧光特性稳定、分子量小、对细胞安全等优点, 因而在微生物定殖、动态检测等研究中广泛应用( Lef,f 1996; E rrampalli et al. , 1998;E lvang et al. , 2001; Pinhe iro et al. , 2008) . 同时, 与FISH、DGGE、rea-l time PCR 等生物技术相比较, GFP检测更为方便, 能够较快捷地追踪检测绿色荧光蛋
白标记菌株在环境中的行为( Pinhe iro et al. , 2008;Campe lo et al. , 2010) . 然而大多数构建的含绿色荧光蛋白基因的质粒不具有广泛适用性, 且标记的菌株不能够稳定遗传表达, 往往需要添加诱导物才能表达荧光, 因而在实际应用中不能够很好地发挥作用( Errampalli et al. , 1998; E lvang et al. , 2001).
pTnM od系列质粒结合了m ini 转座子( minitransposon)稳定转座和质粒自我复制两方面的特点, 在革兰氏阴性细菌中具有很好的诱变功能( Denn is et al. , 1998). 将GFP插入到不同抗性的
pTnM od系列质粒中, 可以较容易地插入到待标记革兰氏阴性细菌的染色体DNA 中, 实现遗传标记稳定
遗传, 同时还可能筛选到与降解有关的基因.
因此, 本文通过构建具有不同抗性且能够组成型表达绿色荧光蛋白的一系列pTnMod 转座子质粒, 并将绿色荧光蛋白基因分别插入到多环芳烃降解菌株基因组内, 研究所获得的转化子在没有抗生素选择压力下连续传代多次后表达荧光蛋白的性能, 以期为进一步研究降解菌在多环芳烃污染环境中的存活能力及生态安全等提供参考.
绿色荧光蛋白( G reen F luorescent Prote in, GFP)具有无种属特异性、荧光特性稳定、分子量小、对细胞安全等优点, 因而在微生物定殖、动态检测等研究中广泛应用( Lef,f 1996; E rrampalli et al. , 1998;E lvang et al. , 2001; Pinhe iro et al. , 2008) . 同时, 与FISH、DGGE、rea-l time PCR 等生物技术相比较, GFP检测更为方便, 能够较快捷地追踪检测绿色荧光蛋
白标记菌株在环境中的行为( Pinhe iro et al. , 2008;Campe lo et al. , 2010) . 然而大多数构建的含绿色荧光蛋白基因的质粒不具有广泛适用性, 且标记的菌株不能够稳定遗传表达, 往往需要添加诱导物才能表达荧光, 因而在实际应用中不能够很好地发挥作用( Errampalli et al. , 1998; E lvang et al. , 2001).
pTnM od系列质粒结合了m ini 转座子( minitransposon)稳定转座和质粒自我复制两方面的特点, 在革兰氏阴性细菌中具有很好的诱变功能( Denn is et al. , 1998). 将GFP插入到不同抗性的
pTnM od系列质粒中, 可以较容易地插入到待标记革兰氏阴性细菌的染色体DNA 中, 实现遗传标记稳定
遗传, 同时还可能筛选到与降解有关的基因.
因此, 本文通过构建具有不同抗性且能够组成型表达绿色荧光蛋白的一系列pTnMod 转座子质粒, 并将绿色荧光蛋白基因分别插入到多环芳烃降解菌株基因组内, 研究所获得的转化子在没有抗生素选择压力下连续传代多次后表达荧光蛋白的性能, 以期为进一步研究降解菌在多环芳烃污染环境中的存活能力及生态安全等提供参考.
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