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关键词：
微生物,安琪酿酒酵母,呼吸缺陷型,管囊酵母,原生质体,再生
发表时间：
2012-09-17 16:29:27
安琪酿酒酵母与管囊酵母原生质体制备和再生
郑永山 | -> | 669| 0| 0.682729MB |微生物,安琪酿酒酵母,呼吸缺陷型,管囊酵母,原生质体,再生
摘要： 通过紫外诱变筛选得到呼吸缺陷型酿酒酵母R40，再以R40 和管囊酵母P01 为亲本，进行原生质体制备与再生的研究，考察了酶浓度、酶解温度和酶解时间对两亲本原生质体制备和再生的影响。结果表明，当酶解时间为1 h，酶浓度为2 %时，35℃下酶解酿酒酵母R40 所得原生质体的形成率和再生率分别达到96.1 %和12.5 %；30 ℃下酶解管囊酵母P01 所得原生质体的形成率和再生率为97.2 %和10.1 %。
随着石油资源日益减少，研究与开发可再生、可持续发展的资源与能源越来越重要。木质纤维素作为地球上最大的再生碳水化合物资源， 正成为各国重点开发的对象[1]。在木质纤维素结构中既含有30 %左右的六碳糖葡萄糖聚合物纤维素，又含有30 %左右的五碳糖聚合物半纤维素。一般酿酒酵母只能利用六碳糖，因此为了提高木质纤维素的生物加工经济性， 必须寻找和开发既可发酵六碳糖的，也可发酵五碳糖的酵母。
自今人们研究最多且最有工业应用前景的戊糖发酵微生物是3 种酵母菌种[2]，即休哈塔假丝酵母(Candida shebatae)、树干毕赤氏酵母(Pichia stipitis)、管囊酵母(Pachysolen tannophilus)， 其戊糖发酵酒精得率在0.28～0.48 g/g(产生的酒精/ 消耗的戊糖)。人们主要利
用基因重组方法中的原生质体融合技术进行菌株改造，获得己糖或戊糖的发酵优良菌株[3]，但利用此方法开发全糖发酵菌株尚不多见。高艳[4]等人利用河南南阳天冠集团酵母开展了原生质体制备和再生条件的研究，为选育浓醪发酵酵母提供菌种。涂振东[5]等人利用原生质融合和各种诱变技术对季也蒙毕赤酵母（Pichia guillermondii Candida shehatea） 进行育种， 但未能得到
高产乙醇的诱变菌株。河南农业大学的陈红歌课题组[6]利用原生质体融合技术构建纤维素燃料乙醇全糖发酵高产菌株，利用得到的融合子进行全糖发酵，得到的酒精度仅为1.3 mL/100 mL(v/v)。白罚利等[7]人利用模式菌株酿酒酵母与嗜鞣管囊酵母进行了原生质体的制备和再生，但没有遗传标记，后期融合难以判断。
本文用从安琪股份有限公司的优质酿酒酵母筛选得到的单倍体菌株和实验室嗜鞣管囊酵母为亲本， 通过选育呼吸缺陷型酿酒酵母作标记， 探讨和优化两个亲本原生质体的制备和再生条件， 为进一步的原生质体融合提供必要的技术准备。
自今人们研究最多且最有工业应用前景的戊糖发酵微生物是3 种酵母菌种[2]，即休哈塔假丝酵母(Candida shebatae)、树干毕赤氏酵母(Pichia stipitis)、管囊酵母(Pachysolen tannophilus)， 其戊糖发酵酒精得率在0.28～0.48 g/g(产生的酒精/ 消耗的戊糖)。人们主要利
用基因重组方法中的原生质体融合技术进行菌株改造，获得己糖或戊糖的发酵优良菌株[3]，但利用此方法开发全糖发酵菌株尚不多见。高艳[4]等人利用河南南阳天冠集团酵母开展了原生质体制备和再生条件的研究，为选育浓醪发酵酵母提供菌种。涂振东[5]等人利用原生质融合和各种诱变技术对季也蒙毕赤酵母（Pichia guillermondii Candida shehatea） 进行育种， 但未能得到
高产乙醇的诱变菌株。河南农业大学的陈红歌课题组[6]利用原生质体融合技术构建纤维素燃料乙醇全糖发酵高产菌株，利用得到的融合子进行全糖发酵，得到的酒精度仅为1.3 mL/100 mL(v/v)。白罚利等[7]人利用模式菌株酿酒酵母与嗜鞣管囊酵母进行了原生质体的制备和再生，但没有遗传标记，后期融合难以判断。
本文用从安琪股份有限公司的优质酿酒酵母筛选得到的单倍体菌株和实验室嗜鞣管囊酵母为亲本， 通过选育呼吸缺陷型酿酒酵母作标记， 探讨和优化两个亲本原生质体的制备和再生条件， 为进一步的原生质体融合提供必要的技术准备。
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