瑞氏木霉纤维素酶基因在酿酒酵母中的表达研究

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摘要: 从瑞氏木霉(!"#$%&’(")* "((+(#)23’4 文库中克隆到外切葡聚糖纤维二糖水解酶5(6785)23’4 基因,将该基因分别连接到酿酒酵母(,*$$%*"&)-$(+ $("(.#+#*()表达载体94:/"%和9;+%""<= 上,构建了重组质粒94:/"%.2>?% 和9;+%""<=.2>?%。分别电转化! 个重组质粒转移至酿酒酵母8%#@ 中,得到重组酵母8A6 和846,实现了6785 的分泌型表达。再将质粒94:/"%.2>?% 转入已含有瑞氏木霉内切葡聚糖酶5 基因(/0 的重组酵母8%B 中,构建了同时表达$1%0 和(/0 的重组酵母菌株8CDA6。比较8CDA6 和8%B 对纤维素底物的降解,前者滤纸酶活比后者提高%/)& E,表明6785 与DF5 对滤纸降解有协同作用。
    纤维素物质是地球上最丰富的可再生资源,植物材料的主要组分除了半纤维素和木素以外,就是纤维素。纤维素物质占地球总生物量的/" E,它由!.%J/.键连接的葡萄糖单位长链组成,这些长链再形成更复杂的纤维素结构。将纤维素物质转化为人类社会所需要的糖类、乙醇及其他化工产品是对可再生资源利用中的一项重要内容,与人类的生存有密切关系。
    丝状真菌瑞氏木霉是目前发现的对纤维素降解最有效的菌种之一。纤维素酶系含有三大类组分:内切葡聚糖酶*KLM(N,O2PLPQKJ DF-、纤维二糖水解酶*2K,,(>R(S?TMU(,PQKJ 678-和葡萄糖苷酶*N,O2(QRMPQKQ-V%W,不同的纤维素酶组分通过相互之间协同作用降解纤维素。因此瑞氏木霉纤维素酶基因的克隆和表达具有重要的意义和广泛的应用前景。
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