麻疯树叶片高效再生体系与不定芽起源

郭天翔 | -> | 500| 0| 1.580943MB |麻疯树,叶片,再生,植物生长调节剂,不定芽,愈伤组织

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摘 要 建立了培养周期短、再生效率高的麻疯树叶片再生体系. 6-BA是诱导麻疯树叶片产生愈伤组织的关键外源激素,添加低浓度的2,4-D能增强6-BA的诱导效果. 最佳愈伤组织诱导培养基是MS + 2.0 mg/L 6-BA + 0.05 mg/L 2,4-D,瘤状愈伤组织的诱导率高达91.98% ± 2.1%. 光培养下产生的愈伤组织质地紧密,瘤状结构丰富,再生能力强. 随着继代次数的增加,愈伤组织褐化加重,逐渐失去再生能力. 不定芽再生培养基中,比较了3种细胞分裂素6-BA、KT和TDZ对诱导愈伤组织分化不定芽的影响. 6-BA诱导不定芽的能力最优,其次是TDZ,KT最差. KT与BA的组合诱导不定芽再生的能力最强,最适的不定芽再生培养基为MS + 0.5 mg/L 6-BA + 0.5 mg/L KT + 0.1 mg/L IBA + 0.1 mg/L GA3,再生率高达68.01% ± 2.5%,平均每个愈伤组织分化出4.25个芽. 70%的再生苗在MS培养基添加0.2 mg/L IBA或NAA(0.1或0.2mg/L)中均能产生根系,平均根系5.2个. 对麻疯树叶片再生的各阶段进行了石蜡切片,揭示了不定芽的起源及发育的全过程,明确了不定芽起源于叶片的表皮细胞层. 图3 表3 参30
    伴随着全球对化石燃料的需求日益增长,存储的化石燃料即将耗尽[1],人们越来越关注可再生的生物柴油. 在可产生生物柴油的候选植物中,属于大戟科的麻疯树(Jatrohacurcas L.)具有明显的优势,它的种子含油量高,种仁含油量可达40%~60% [2],同时,麻疯树油中含有活性成分多,如毒蛋白、麻疯酮等有着重要的农药和医药价值[3]. 最近研究表明,麻疯树油不仅可以在肥皂和医药行业发挥作用[4],提取油后的渣还可作肥料,树叶可饲养家蚕,一些杂交品种还被用来美化和绿化环境[5].
    然而,大力推广麻疯树的种植却面临一系列问题,虽然麻疯树种子中含油量高,但种子产量不高;种油中活性成分多,但仍需要改变油的成分才能直接替代化石燃料;麻疯树对环境要求较高,耐寒能力弱,分布区域较窄. 麻疯树属包括175个种,可以通过种间杂交引入优良性状,但所需周期长,不能够获得特异的外源基因,故主要通过基因转化改变遗传背景[6]. 高频率的植株再生体系是基因转化的基础. 目前国内外在麻疯树的植株再生上采用了多种外植体,包括茎段、胚轴,叶柄、子叶、叶片、腋芽,经由愈伤组织或是直接再生的方式获得再生植株[7~14]. 然而,这些再生体系均存在周期长(80 d以上)、再生率不高的问题,制约了麻疯树遗传转化研究的开展. 本研究缩短了麻疯树叶片再生的周期,提高了不定芽的再生率,并揭示了不定芽的起源和发育过程,确定了转化的目标细胞层,为今后开展麻疯树基因改良奠定了基础.
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