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关键词：
柱前衍生,液相色谱-串联质谱,草铵膦,茶叶
发表时间：
2013-10-10 09:04:54
柱前衍生高效液相色谱_荧光检测法测定血浆中同型半胱氨酸_唐秀芳
王亚楠 | -> | 1185| 2| 0.283238MB |高效液相色谱,荧光检测,同型半胱氨酸,血浆
摘要: 建立了一种柱前衍生高效液相色谱-荧光检测法用于测定血浆中同型半胱氨酸( Hcy) 。使用三( 2-羧乙基) 膦盐酸盐( TCEP) 为还原剂，N-( 1-芘) 马来酰亚胺( NPM) 为衍生剂进行样品预处理，Agilent Hypersil C-18 柱( 250mm × 4. 0 mm，5 μm) 进行分离，流动相为15 mmol /L 醋酸钠-乙腈-混合酸( 300 mL 水中含1 mL 醋酸和1 mL 磷酸) 混合溶液，采用梯度洗脱，荧光检测激发波长为330 nm，发射波长为380 nm。Hcy 的回收率为( 102. 08 ±4. 94) %。线性范围为0. 500 ～ 100 μmol /L，检出限( 以信噪比为3 计) 为0. 016 μmol /L。日内与日间相对标准偏差均小于5%。利用该方法对7 例高血压患者和7 例健康志愿者的血浆进行了测定，结果表明两组间的Hcy 含量存在显著的差异( p ＜ 0. 05) 。本方法简单、快速、灵敏、特异，适用于血浆Hcy 的临床定量测定。
同型半胱氨酸( homocysteine，Hcy) 是一种含硫氨基酸，为甲硫氨酸( methionine，Met) 代谢过程中的重要中间产物。研究表明同型半胱氨酸与肾病、老年痴呆症、高血压等多种疾病有关，是导致心血管疾病的一个独立危险的致病因子［1 － 4］。另有研究指出同型半胱氨酸是致癌的又一危险因子［5］。因此定量监测血浆中Hcy 浓度可为一些疾病的诊断、治疗及预防提供实验依据。目前检测Hcy 的方法有气相色谱-质谱( GC-MS) 联用法［6］、荧光偏振免疫法( FPIA ) ［7］、酶联免疫吸附测定法( ELISA) ［8］、循环酶法以及柱前衍生高效液相色谱( HPLC) -荧光检测法［9］。HPLC 荧光检测法应用最为广泛，是一种经典的检测方法。柱前衍生最常用的衍生剂是7-氟苯呋咱-4-硫酸铵盐( SBD-F) ［10， 11］。但因其是弱反应剂，需要较高的反应温度和较长的反应时间，且对光不稳定，需避光操作，增加了操作的难度［12］。本文建立了一种柱前衍生HPLC 荧光检测法用于测定血浆中的Hcy，选用N-( 1-芘) 马来酰亚胺( NPM) 为Hcy 的衍生剂( 见图1) 。NPM 是巯基的特异性衍生剂［13］，该衍生反应在室温下仅10 min 便可完成，产生的荧光效率高且稳定，色谱峰形良好，是一种理想的硫醇物荧光衍生剂。本方法简便、快速、灵敏、特异，适用于血浆中Hcy 的临床定量测定。
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