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聚丙烯酰胺凝胶电泳前活性染料与蛋白质共价染色的条件探索

蒋如鹄 | -> | 2295| 9| 0.50397MB |聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白染色,活性染料

蒋如鹄 蒋如鹄 | 文档量 |浏览量34452

摘要采用聚丙烯酰胺凝胶电泳前染色法,考察了多种类型活性染料与牛血清白蛋白共价染色的条件。实验发现,活性蓝KN-R 型标记效果最佳,其优化标记条件为: pH 10. 0,60 ℃,50 min,蛋白检出限达200 ng,重复性和测试范围内的定量性较好,可在电泳时直接实时观测,作为蛋白标示剂有一定的应用前景。
    采用聚丙烯酰胺凝胶电泳( PAGE) 法对蛋白质等样品进行分离[1],一般需要对分离样品进行染色,以检验分离效果,这主要是利用染料和生物大分子( 如蛋白质等) 结合生成有色的复合物来实现检测的目的。目前,比较常见的染色方法有后染色法和前染色法。后染色法是在电泳之后进行蛋白质染色的方法,考马斯亮蓝染色和银染法就是最为常见的两种蛋白电泳后染色法[2]。人们尝试用荧光染料对凝胶中的蛋白质条带进行染色[3,4],但这种方法需要在UV 瞬变显示器或紫外灯下观测,不能实时观察分离过程。后染色法需要在电泳之后再进行一步染色操作,耗时。前染色法,即预染色法,是在电泳前对蛋白质染色的一种方法。前染色法操作简单方便,而且可在电泳同时实时观察蛋白质的电泳分离带。本研究比较了几组商品化活性染料的蛋白质染色条件,可用肉眼直接观测分离过程。活性染料廉价易得,对用作蛋白标示剂[5]具有一定的意义。
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