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关键词：
反相高效液相色谱,柱前衍生,游离氨基酸,猪肉,汤汁
发表时间：
2012-02-27 09:39:31
摘要: 建立了一种新的微乳体系，并成功地应用于微乳液相色谱法( MELC) 快速分析脂溶性维生素VA、VD2、VD3和VE。通过对影响分离选择性的主要因素进行考察，得到最佳微乳体系组成为98% ( v /v) ( 50 g /L 十二烷基硫酸钠( SDS) -10%( 质量分数) 正丁醇-1. 0%( 质量分数) 正辛烷-84% 水( 质量分数) ) -2% ( v /v) 乙腈。该微乳体系中，表面活性剂类型和浓度、油相正辛烷的含量、有机添加剂乙腈对脂溶性维生素的分离起到了重要的作用。以VenusilASB C18色谱柱( 150 mm × 4. 6 mm，5 μm) 为分离柱，流速为0. 7 mL/min，检测波长为265 nm，柱温为40 ℃，VA、VD2、VD3和VE在20 min 内达到基线分离。4 种脂溶性维生素的保留时间和峰面积的相对标准偏差( RSD) ( n = 5)分别小于2. 3%和3. 0%; VA、VD2、VD3和VE的线性范围分别为22. 0 ～ 88. 0 mg /L、20. 2 ～ 81. 0 mg /L、24. 3 ～ 97. 2mg /L 和125. 0 ～ 500. 0 mg /L，相应的线性相关系数r2 分别为0. 999 6、0. 999 4、0. 999 8、0. 999 8; 检出限( S /N = 3)分别为0. 37、0. 34、0. 41 和2. 12 mg /L。本方法已成功应用于多维元素片( 21) 中VA与VE的测定，结果令人满意。
维生素也称维他命，是动物体及人类正常物质代谢和某些特殊生理功能不可缺少的低分子有机化合物，主要参与各种酶的组成［1，2］。通常按溶解性把维生素分为脂溶性和水溶性两大类。维生素A( vitamin A，VA) 、维生素D2( vitamin D2，VD2) 、维生素D3( vitamin D3，VD3
) 、维生素E ( vitamin E，VE)是4 种最常见的脂溶性维生素，它们对人体生理活动有非常重要的作用，因此建立这4 种脂溶性维生素的同时检测方法十分必要。脂溶性维生素的分析现多采用高效液相色谱法( HPLC) ，一般使用紫外检测器( UV) ［2］、二极管阵列检测器( DAD) ［3］、荧光检测器( FID) ［4］和蒸发光散射检测器( ELSD) ［5］等。传统的HPLC 法流动相需要使用近乎100% 的有机溶剂［3］，对于多种维生素的分离选择性小，毒性大。
) 、维生素E ( vitamin E，VE)是4 种最常见的脂溶性维生素，它们对人体生理活动有非常重要的作用，因此建立这4 种脂溶性维生素的同时检测方法十分必要。脂溶性维生素的分析现多采用高效液相色谱法( HPLC) ，一般使用紫外检测器( UV) ［2］、二极管阵列检测器( DAD) ［3］、荧光检测器( FID) ［4］和蒸发光散射检测器( ELSD) ［5］等。传统的HPLC 法流动相需要使用近乎100% 的有机溶剂［3］，对于多种维生素的分离选择性小，毒性大。
微乳液相色谱( microemulsion liquid chromatography，MELC) 是在胶束液相色谱( micellar iquidchromatography，MLC) ［6］基础上发展起来的一种液相色谱新技术。自从1992 年Berhod 等［7，8］首次将微乳应用到HPLC 中，MELC 便以独特的分离选择性和广泛的适用性引起人们的极大关注。应用较多的是水包油型反相MELC，其分离机制是溶质在固定相、伪固定相( 表面活性剂在固定相的吸附层) 、多相分散相( 微乳液滴) 和水相进行的动态吸附-解吸过程。由于分离过程的复杂性，可控参数较多，使得具有不同极性的组分在等度洗脱下短时间内达到
有效的分离。目前，MELC 中所用的微乳体系多数是参考微乳电动色谱( microemulsion electrokineticchromatography，MEEKC) 而来的［9］，MELC 主要应用在多组分的分离［10 － 12］、药物及其杂质的分离检测［13 － 15］以及生物样品的检测［16］等。采用MEEKC分离脂溶性维生素和水溶性维生素已有多篇报道［17 － 20］，而采用MELC 分离脂溶性维生素的文献报
道很少。Momenbeik 等［21］以73. 6 mmol /L 十二烷基硫酸钠( SDS) -13. 64% ( v /v) 正丁醇-0. 48% ( v /v) 二乙醚为流动相测定多种脂溶性维生素的含量，采用人工神经网络对影响分离选择性和效率的主要因素进行优化，但维生素E 与维生素K 没有达到基线分离，维生素A 的柱效低，且样品图谱背景干扰较大。本文运用MELC 分离了4 种脂溶性维生素，在20 min 内达到基线分离; 通过对表面活性剂和油相含量、有机添加剂等影响因素的考察，发现流动相中正辛烷和乙腈含量对VA、VD2和VD3的分离度影响较大; 通过进一步优化实验条件及方法学验证，所得分析结果符合要求。应用所建立的方法对多种脂溶性维生素进行了测定，结果表明该方法简便、快速、准确、绿色环保。
有效的分离。目前，MELC 中所用的微乳体系多数是参考微乳电动色谱( microemulsion electrokineticchromatography，MEEKC) 而来的［9］，MELC 主要应用在多组分的分离［10 － 12］、药物及其杂质的分离检测［13 － 15］以及生物样品的检测［16］等。采用MEEKC分离脂溶性维生素和水溶性维生素已有多篇报道［17 － 20］，而采用MELC 分离脂溶性维生素的文献报
道很少。Momenbeik 等［21］以73. 6 mmol /L 十二烷基硫酸钠( SDS) -13. 64% ( v /v) 正丁醇-0. 48% ( v /v) 二乙醚为流动相测定多种脂溶性维生素的含量，采用人工神经网络对影响分离选择性和效率的主要因素进行优化，但维生素E 与维生素K 没有达到基线分离，维生素A 的柱效低，且样品图谱背景干扰较大。本文运用MELC 分离了4 种脂溶性维生素，在20 min 内达到基线分离; 通过对表面活性剂和油相含量、有机添加剂等影响因素的考察，发现流动相中正辛烷和乙腈含量对VA、VD2和VD3的分离度影响较大; 通过进一步优化实验条件及方法学验证，所得分析结果符合要求。应用所建立的方法对多种脂溶性维生素进行了测定，结果表明该方法简便、快速、准确、绿色环保。
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