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关键词：
重金属,多环芳烃,沉积物,生态风险评价,厦门湾
发表时间：
2013-01-28 10:12:02
肿瘤靶向性细胞穿膜肽的固相合成及体外活性研究
王笑笑 | -> | 749| 2| 2110.545MB |肝肿瘤,肿瘤靶向性,细胞穿膜肽,N-芴甲氧羰基,固相合成,基质金属蛋白酶2
摘要：目的采用固相合成法合成以基质金属蛋白酶为靶点的肿瘤靶向性细胞穿膜肽，用5-羧基四甲基罗丹明对其进行荧光标记，并对合成的产物进行生物活性和细胞毒性评估。方法采用N-芴甲氧羰基（Fmoc）作为α-氨基酸的保护基，以逐个延伸的固相合成法合成肿瘤靶向性细胞穿膜肽，并在有耦合剂HATU和DMF的情况下，加入5-羧基四甲基罗丹明进行荧光标记，应用高效液相色谱分析仪和质谱仪测定其纯度和分子量；荧光显微镜观察穿膜肽对体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721和正常肝脏细胞株LO2的穿膜效果，以评价穿膜肽的生物学活性；MTT比法检测穿膜肽对SMMC-7721细胞活性的影响。结果所合成的细胞穿膜肽经高效液相色谱法鉴定纯度为96.05%，经质谱鉴定相对分子量为3504.9。这种穿膜肽对正常肝脏细胞株LO2无明显穿膜作用，但对肝癌细胞株SMMC-7721有较强的穿膜作用，并且对细胞活性无明显影响。结论采用Fmoc固相肽合成法成功合成细胞穿膜肽；所合成的细胞穿膜肽具有肿瘤靶向性。
穿膜肽是一类能够穿透细胞膜进入细胞质甚至细胞核而不损坏细胞膜结构的小分子多肽，它的长度一般不超过30 个氨基酸。近几年的研究证实，穿膜肽能运载一系列具有不同生物学活性的物质进入活细胞内，包括蛋白、多肽、核酸和寡聚核苷酸等[1]。发卡形穿膜肽属于新型的选择性穿膜的小肽，发卡结构区可以构建多种蛋白酶切位点，为分子靶向诊断和治疗提供了新的思路[2]。由于几乎所有的恶性肿瘤均表达基质金属蛋白酶2（MMP-2），并且MMP-2 表达与肿瘤恶性程度、血管生成、侵袭及转移密切相关，它在肿瘤细胞过表达的酶中最具特征[3-5]，因此我们选择MMP-2 作为本研究合成的穿膜肽的作用靶点。本研究采用固相合成的方法合成具有MMP-2 识别位点的发卡形穿膜肽并以荧光标记，并探讨其肿瘤细胞靶向性及对细胞活性的影响。
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