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毒死蜱多克隆抗体的制备

穆青 | -> | 1322| 0| 0.230299MB |毒死蜱,半抗原,多克隆抗体

穆青 穆青 | 文档量 |浏览量35013

摘 要: 以三氯硫磷为起始原料, 经三步反应合成得到毒死蜱半抗原O-乙基O-( 3, 5, 6-三氯-2-吡啶基)N-( 3-羧丙基)硫逐磷酸胺(简称CHB u) , 此半抗原分别与牛血清蛋白( B SA ) 和卵清蛋白(OVA )用碳二亚胺法和混合酸酐法通过偶联反应得到免疫抗原和包被抗原, 其结合比分别为14. 6 B1和6. 2 B1。用所得的免疫原免疫兔子获得了高效价(抗血清: 2. 56 @ 104; 冻干粉: 2. 56 106 )、高亲和性、特异性好的多克隆抗体。交叉反应试验表明, 该抗体与毒死蜱各结构类似物交叉反应率均小于4%; 亲和性试验表明, 在1~ 500 ng /mL 浓度范围内, 抑制率与浓度呈线性关系, 线性回归方程为y= 23. 503 lg( x ) + 28. 556, r = 0. 991 9, 抑制中浓度I50 = 8. 2 ng /mL, 最低检测限为1. 0 ng /mL。
    毒死蜱[ chlo rpy rifo s, O, O -二乙基-O -( 3, 5, 6-三氯-2-吡啶基)硫逐磷酸酯]是一种在世界范围内广泛应用的高效杀虫剂, 可用于粮食、蔬菜、水果及经济作物的害虫防治[ 1] 。它对哺乳动物毒性中等, 但对非靶标水生生物毒性较高[ 2, 3] 。其在粮食、环境样品等方面的残留问题已日益受到人们的重视[ 4~ 7] 。目前, 有关毒死蜱残留量的分析多采用气相色谱法[ 6, 7] 。由于常规仪器分析方法不适于批量样品的筛选检测或现场检测任务, 而酶联免疫法( EL ISA ) 因其具有快速、方便、廉价等优点, 受到人们越来越多的关注。迄今为止, 国内外已有用酶联免疫吸附测定法检测毒死蜱残留的报道[ 8~ 11 ] 。制备毒死蜱半抗原时, 一般可从毒死蜱
分子的两个部位进行结构修饰(见图1)。
    朱国念等[ 10] 采用3-巯基丙酸与毒死蜱反应得到第一种类型的半抗原; M anc lus等[ 8 ] 采用5步反应路线合成出了第二种类型的半抗原(结构见图2)。
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