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关键词：
昆虫病原线虫,共生菌,细胞内代谢产物,抑菌活性
发表时间：
2012-06-19 15:13:30
抗氰戊菊酯棉铃虫细胞色素P450CYP6B7基因的克隆及分析
韩英涛 | -> | 727| 1| 0.794938MB |棉铃虫,氰戊菊酯,抗药性,细胞色素P450,CYP 6B7,RT-PCR
摘 要: 以抗氰戊菊酯棉铃虫六龄幼虫中肠组织总RNA 为模板, 采用特异性引物, 通过对反转录-聚合酶链式反应( RT-PCR )的条件进行不断探索和优化, 成功克隆出全长为1 557 bp的基因片段( G enB ank登录号DQ 497428)。该片段包括一个完整的开放阅读框架( 1 515 bp)及5c端的42个碱基, 编码504 个氨基酸残基。与国外报道的细胞色素P450 CYP 6B 7 基因( GenB ank 登录号AF031468)的核苷酸、氨基酸同源性分别为97. 75% 和98. 81% , 为CYP 6B 7的等位基因。N o rthern杂交分析表明, 抗性品系棉铃虫中肠组织中CYP 6B 7mRNA 的表达量明显高于敏感品系的, 初步表明CYP 6B 7在棉铃虫对氰戊菊酯的抗药性中起着重要作用。
细胞色素P450 基因家族是古老的超基因家族, 由其编码的P450酶系是自然界中最具催化类型多样性的生物催化剂[ 1] 。这为生物体催化降解外源物质和代谢体内有毒物质提供了可选择的途径, 对保障生物体的正常生理机能具有重要作用。研究表明, P450酶系的含量及活性的增强是多种害虫对杀虫剂产生抗药性的主要原因之一[ 2 ~ 5 ] 。
棉铃虫是一种世界性农业害虫, 20 世纪90年代中期该虫大发生曾造成我国棉花生产的巨大损
失[ 6 ] 。目前, 对棉铃虫细胞色素P450基因的研究主要是围绕可能与抗药性相关的CYP 4G 8[ 7] 、CYP 6B 2[ 8] 和CYP 6B 7[ 9] 等基因展开, 但有关其对杀虫剂的催化代谢能力及规律还尚未见研究报道。将P450基因克隆并异源表达是进行该研究的有效手段。作者根据国外报道的棉铃虫CYP 6B 7基因( G enB ank AF031468 )的核苷酸序列设计特异性引物, 以室内选育的抗氰戊菊酯棉铃虫6龄幼虫中肠组织总RNA 为模板, 经过对RTPCR方法的条件进行优化, 成功地克隆出国内抗性棉铃虫的CYP 6B 7等位基因片段。
棉铃虫是一种世界性农业害虫, 20 世纪90年代中期该虫大发生曾造成我国棉花生产的巨大损
失[ 6 ] 。目前, 对棉铃虫细胞色素P450基因的研究主要是围绕可能与抗药性相关的CYP 4G 8[ 7] 、CYP 6B 2[ 8] 和CYP 6B 7[ 9] 等基因展开, 但有关其对杀虫剂的催化代谢能力及规律还尚未见研究报道。将P450基因克隆并异源表达是进行该研究的有效手段。作者根据国外报道的棉铃虫CYP 6B 7基因( G enB ank AF031468 )的核苷酸序列设计特异性引物, 以室内选育的抗氰戊菊酯棉铃虫6龄幼虫中肠组织总RNA 为模板, 经过对RTPCR方法的条件进行优化, 成功地克隆出国内抗性棉铃虫的CYP 6B 7等位基因片段。
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