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关键词：
三磷酸腺苷,脂质体,正交设计,疏水性离子对,缺血心肌
发表时间：
2012-07-20 17:15:53
摘要: 本研究拟建立体外人源可溶性环氧化物水解酶 (hsEH) 抑制剂高通量筛选模型, 筛选hsEH 抑制剂。利用大肠杆菌表达重组hsEH, 化学合成其特异性的底物PHOME, 建立了基于荧光测定的以384 孔微板为载体的hsEH 抑制剂高通量筛选模型 (Z ' = 0.65)。对47 360 种样品 (包括25 040 种化合物和22 320 种天然产物) 进行初筛, 选择初筛抑制率大于80%的950 种样品作为活性样品进行复筛。最终确定2 个化合物具有较强的抑制活性, 其IC50 值分别为8.56 和4.31 μmol·L−1。结果表明, 所建立的hsEH 抑制剂高通量筛选模型具有灵敏、稳定、重复性好的特点。
环氧化物水解酶 (epoxide hydrolase, EH,EC.3.3.2.3) 是脊椎动物体内广泛存在的可以水解外
源性以及内源性环氧化物生成二醇衍生物的一种酶,由554 个氨基酸残基组成, 分子质量约为60 kDa。在哺乳动物EH 可以分为微粒体型、胆固醇型、白三烯A4 型以及胞质型 (即可溶性EH, sEH) 等类型。这几种EH 序列同源性很低 (氨基酸同源性<5%), 底物特异性明显不同[1−3]。
源性以及内源性环氧化物生成二醇衍生物的一种酶,由554 个氨基酸残基组成, 分子质量约为60 kDa。在哺乳动物EH 可以分为微粒体型、胆固醇型、白三烯A4 型以及胞质型 (即可溶性EH, sEH) 等类型。这几种EH 序列同源性很低 (氨基酸同源性<5%), 底物特异性明显不同[1−3]。
环氧二十碳三烯酸 (EETs) 是参与调节血管稳态、血压、缺血性损伤以及炎症等过程的一种旁分泌和自分泌信号分子。它们广泛分布于肺、心脏和肾脏微血管的内皮组织中[4, 5]。近年研究显示, EETs 就是内皮源性超极化因子 (EDHF), 进一步证明了EETs具有重要的生理作用。EETs 是可溶性环氧化物水解酶 (sEH) 的内源性底物, 后者是EETs 的主要失活酶,是体内降低EETs 水平的最重要途径, sEH 通过催化EETs 等脂肪族环氧化物水解生成相应的二羟基衍生物, 这一反应将EETs 转化为难以掺入脂质双层的物质, 增大其极性并使其生物活性丧失, 最后被排泌出体外[6]。多项研究显示, sEH 参与了高血压、缺血性损伤等心脑血管疾病进程, 为临床治疗和药物研发提供了一个新颖的作用靶点[7−11]。
本研究通过利用大肠杆菌表达重组hsEH 蛋白,并合成其特异性底物PHOME, 建立了基于荧光分析
的灵敏、特异和操作性强的高通量筛选模型, 用于本中心样品库的高通量筛选, 为寻找hsEH 抑制剂提供有力的工具。
本研究通过利用大肠杆菌表达重组hsEH 蛋白,并合成其特异性底物PHOME, 建立了基于荧光分析
的灵敏、特异和操作性强的高通量筛选模型, 用于本中心样品库的高通量筛选, 为寻找hsEH 抑制剂提供有力的工具。
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