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关键词：
保护地,管理类别,功能分区,IUCN,管理目标
发表时间：
2013-12-17 11:37:25
摘 要 为了解白囊耙齿菌腐朽木材的分子机制，利用基因差异显示技术（Differential display reverse tranase，PCRDDRT-PCR）研究了白囊耙齿菌腐朽白桦木材前后基因表达的差异. 共分离出5个腐朽后在菌丝体中特异表达的cDNA片段，分别命名为A2、A7、C6、B8和B3. 序列同源性比对发现：片段A2、A7 和C6分别与编码漆酶（Laccase）、纤维素酶A（Cellulase A）和麦芽糊精磷酸化酶（Maltodextrin phosphorylase）等3个基因具有高度同源性；B8与一个编码响应调节蛋白的基因具有高度同源性. 研究结果显示，所筛选的差异表达基因A2、A7和C6等与木材降解有密切关系. 图2 表2 参22
木材是一种具有多种用途的可再生资源，但是木材腐朽的广泛发生给木材生产带来了巨大损失[1]. 因此木材腐朽机理一直都是国内外研究的重点，例如有关木材腐朽过程中的显微特性及酶学方面已经做了大量研究工作[2~3]. 真菌的寄生是导致木材腐朽的主要原因，因此对真菌腐朽木材过程中相关基因的分离和鉴定工作也显得至关重要. 白囊耙齿菌（Irpex lacteus）是一种担子菌，生长于阔叶或针叶树的活立木、枯立木或倒木上，引起木材的白色腐朽[4]. 有关白囊耙齿菌腐朽木材的分子机理方面的研究还未见报道.
一般来说，在木材腐朽过程中会发生一系列的生理生化改变，从而诱导一些木材寄生菌基因的特异表达[5~6]. 其中mRNA差异显示反转录PCR技术（Differential display reversetranase-PCR，DDRT-PCR）自创立以来，已经被广泛用于差异表达基因的鉴定，该技术具有灵敏度高、速度快、操作简单等优点[7~10]. 通常高等真核生物的基因较多，这些基因
在生物整个生长发育过程中具有阶段性表达的特点，或者在某种特殊条件下实施表达，这些不同时间、不同组织的基因表达方式一般被称作基因的差别表达[11]. 研究不同时间、不同组织基因表达的差异对于研究生物生长发育的调控机制具有重大的理论与实践意义. 在本研究中，为了了解白囊耙齿菌在木材腐朽过程中的作用机制，以接种白桦木材的白囊耙齿菌菌丝体为研究对象，同时以未接种白桦木材的白囊耙齿菌菌丝体为对照，提取二者的总RNA. 利用DDRT-PCR技术对差异表达基因进行分析，发现片段A2、A7、C6和B8分别与漆酶、纤维素酶A、麦芽糊精磷酸化酶以及响应调节蛋
白基因具有高度的核苷酸一致性. 为了降低假阳性的出现，采用反向Northern技术对差异表达基因进行了进一步分析鉴定. 反向Northern杂交是Zhang等人在1996年首次提出的，这种方法与传统的Northern技术相比，只需制备两个cDNA探针，既可以减少工作量，又可以节省经费和时间[12~13]. 在本研究中，从白囊耙齿菌中分离到5个在腐朽木材后的真菌菌丝中特异表达的cDNA差异片段, 这将为从分子水平上阐明白囊耙齿菌菌腐朽木材的机制提供新依据.
在生物整个生长发育过程中具有阶段性表达的特点，或者在某种特殊条件下实施表达，这些不同时间、不同组织的基因表达方式一般被称作基因的差别表达[11]. 研究不同时间、不同组织基因表达的差异对于研究生物生长发育的调控机制具有重大的理论与实践意义. 在本研究中，为了了解白囊耙齿菌在木材腐朽过程中的作用机制，以接种白桦木材的白囊耙齿菌菌丝体为研究对象，同时以未接种白桦木材的白囊耙齿菌菌丝体为对照，提取二者的总RNA. 利用DDRT-PCR技术对差异表达基因进行分析，发现片段A2、A7、C6和B8分别与漆酶、纤维素酶A、麦芽糊精磷酸化酶以及响应调节蛋
白基因具有高度的核苷酸一致性. 为了降低假阳性的出现，采用反向Northern技术对差异表达基因进行了进一步分析鉴定. 反向Northern杂交是Zhang等人在1996年首次提出的，这种方法与传统的Northern技术相比，只需制备两个cDNA探针，既可以减少工作量，又可以节省经费和时间[12~13]. 在本研究中，从白囊耙齿菌中分离到5个在腐朽木材后的真菌菌丝中特异表达的cDNA差异片段, 这将为从分子水平上阐明白囊耙齿菌菌腐朽木材的机制提供新依据.
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