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关键词：
燃烧法,红色荧光粉,SrO·Y2O3∶Eu
发表时间：
2011-12-21 17:29:43
摘要将鼠肝肿瘤组织蛋白及其酶解产物经4-氟-7-硝基-2，1，3-苯并氧杂恶二唑( NBD-F) 在50mmol /L 硼砂缓冲溶液( pH 8． 5) 中室温避光衍生1 h 后，采用高效液相色谱-激光诱导荧光检测法( HPLC-LIF) 分析( λex= 473 nm，λem = 525 nm) ，并与高效液相色谱-紫外检测法( HPLC-UV) 在检测波长214 nm 所得结果进行对比。对蛋白质酶解产物的分析结果表明，LIF 检测器因其更高的检测灵敏度，可显著提高检测能力，多数色谱峰较紫外信号高10 倍以上，最终多检测到42 个峰。进一步对鼠肝肿瘤组织蛋白提取液的检测结果进行对比，HPLC-UV 法检测到的组分集中在强极性区域，说明样品中极性组分的紫外吸收较强; HPLC-LIF 法检测到的组分更多集中在弱极性和非极性区域，一方面因为衍生化能够改变组分的极性，另一方面因为弱极性和非极性组分更容易被衍生化，此结果也说明两种方法对样品的检测选择性存在明显差异。通过改变荧光衍生化反应条件( 溶液pH 值、缓冲液介质) 对复杂样品进行选择性标记，有利于实现对低丰度蛋白和多肽的选择性检测。
对具有重要生理或病理功能的低丰度蛋白进行定性与定量分析是蛋白质组学研究的重要内容。目
前，能够与高效液相色谱串联用于复杂生物样品分析的检测方法，包括质谱法［1，2］、紫外法［3，4］和荧光法［5，6］等。质谱法能够提供丰富的分子片段信息，是蛋白质定性的首选方法; 但质谱定量过程复杂。与之相比，光谱法检测不仅操作简便，而且可以与色谱无损联接，是快速定量分析的理想选择。最常用的紫外检测器及普通荧光检测器灵敏度相对较低，限制了其在低丰度蛋白检测中的应用。
激光诱导荧光检测器采用激光作为激发光源，具有极高的检测灵敏度( 比紫外法高3 ～ 4 个数量级［7 ～ 9］) ，甚至可实现单分子检测［10］。Katzenmeyer 等［11］构建了高效液相色谱-激光诱导荧光-质谱( HPLC-LIF-MS) 联用系统，对抗肿瘤药阿霉素( Doxorubicin) 及两种代谢产物进行了定性与定量分析，LIF 检测器的引入使得药物代谢过程中的实时浓度监测成为可能。Kumar 等［12］采用HPLC-LIF 法对蛋白含量低至10 － 15 ～ 10 － 16 mol 级的乳房组织提取液进行分离检测，并结合主成分分析( PCA) 对不同试样( 正常、恶性、良性及经过处理的样品) 进行分类研究; Bhat 等［13］采用类似方法对子宫颈细胞试样开展研究，证实HPLC-LIF 方法灵敏度高、特异性好，将其与PCA 等数据处理方法结合有望用于对肿瘤组织的诊断。
本研究以鼠肝肿瘤组织蛋白为研究对象，比较了高效液相色谱-激光诱导荧光检测法( HPLC-LIF)
及高效液相色谱-紫外检测法( HPLC-UV) 的检测灵敏度和选择性，说明其在复杂生物样品中低丰度蛋
白定量分析方面的特征。
前，能够与高效液相色谱串联用于复杂生物样品分析的检测方法，包括质谱法［1，2］、紫外法［3，4］和荧光法［5，6］等。质谱法能够提供丰富的分子片段信息，是蛋白质定性的首选方法; 但质谱定量过程复杂。与之相比，光谱法检测不仅操作简便，而且可以与色谱无损联接，是快速定量分析的理想选择。最常用的紫外检测器及普通荧光检测器灵敏度相对较低，限制了其在低丰度蛋白检测中的应用。
激光诱导荧光检测器采用激光作为激发光源，具有极高的检测灵敏度( 比紫外法高3 ～ 4 个数量级［7 ～ 9］) ，甚至可实现单分子检测［10］。Katzenmeyer 等［11］构建了高效液相色谱-激光诱导荧光-质谱( HPLC-LIF-MS) 联用系统，对抗肿瘤药阿霉素( Doxorubicin) 及两种代谢产物进行了定性与定量分析，LIF 检测器的引入使得药物代谢过程中的实时浓度监测成为可能。Kumar 等［12］采用HPLC-LIF 法对蛋白含量低至10 － 15 ～ 10 － 16 mol 级的乳房组织提取液进行分离检测，并结合主成分分析( PCA) 对不同试样( 正常、恶性、良性及经过处理的样品) 进行分类研究; Bhat 等［13］采用类似方法对子宫颈细胞试样开展研究，证实HPLC-LIF 方法灵敏度高、特异性好，将其与PCA 等数据处理方法结合有望用于对肿瘤组织的诊断。
本研究以鼠肝肿瘤组织蛋白为研究对象，比较了高效液相色谱-激光诱导荧光检测法( HPLC-LIF)
及高效液相色谱-紫外检测法( HPLC-UV) 的检测灵敏度和选择性，说明其在复杂生物样品中低丰度蛋
白定量分析方面的特征。
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