基于巯基_烯点击化学法的_环糊精固定相多模式色谱保留行为研究

摘要: 基于巯基硅胶与单取代-6A-烯丙氨基-β-环糊精的巯基-烯点击化学反应，制备了β-环糊精( Click TE-CD) 共价键合固定相。元素分析结果表明β-环糊精被成功键合到硅胶表面。以黄酮苷类化合物为模型，考察了Click TECD固定相在亲水、反相和超临界流体色谱等分离模式下的色谱保留行为。黄酮苷类化合物保留时间随流动相中乙腈含量的变化呈现典型的U 型曲线，表明Click TE-CD 固定相具有亲水/反相的双重保留特性。应用几何学方法测得Click TE-CD 固定相在反相/亲水、亲水/超临界、反相/超临界混合模式下的正交性分别为69. 8%、50. 8%、50. 8%。对比复杂中药样品降香提取物在反相、亲水、超临界等模式下的分离情况，结果表明Click TE-CD 固定相在分离中药复杂样品方面具有极大潜力，可以在一根色谱柱上通过分离模式的改变，实现二维液相色谱的分离。Click TE-CD 固定相不同分离模式的分离性能和较好的正交性表明该固定相具有在液相色谱方法发展和二维液相色谱分离方面应用的潜力。

    环糊精( cyclodextrin，CD) 具有独特的外部亲水、内部疏水特性，人们合成了多种环糊精固定相，用于化合物的分离。在这些环糊精固定相中应用最广泛的是β-CD 固定相。自从Armstrong［1］首次将β-CD 稳定地共价键合到硅胶上制备成色谱固定相以来，键合CD 固定相被广泛应用于正相、反相等模式的高效液相色谱中来分离手性化合物和位置异构体［2，3］。1990 年Alpert［4］提出亲水色谱( hydrophilicinteraction chromatography，HILIC) 概念后，人们开始关注β-CD 固定相在极性化合物分离方面的应用，将其用于亲水色谱来分离一些中等极性和极性较大的化合物［5 － 7］。
    Kawaguchi 等［8］和Fujimura 等［9］分别合成了硅基氨和酰胺键合固定相，但这些固定相稳定性差，易水解。1985 年，Armstrong［1］通过碳-氧-碳醚键连接方式把β-CD 稳定键合到硅胶上，制成不易水解的键合β-CD 固定相，该固定相可以有效地分离位置异构体和对映异构体［10］。在此基础上，不同间隔臂的CD 键合固定相和衍生化CD 键合固定相得到很大发展。比较典型的为Hargitai 等［11］用6 种不同的空间间隔臂将硅胶和β-CD 连接起来，制得不同的β-CD 键合手性固定相，并对14 种手性化合物进行了拆分。Zhang 等［12］通过Staudinger 反应将β-CD键合到硅胶上，制备了几种不同衍生化的β-CD 键合固定相。2001 年Sharpless 等［13］提出点击化学的概念。由于其具有高效、高选择性等优势，我们课题组把基于Cu( I) 催化的叠氮-炔基1，3-偶极环加成反应的点击化学技术应用到色谱固定相合成中，制备了许多新型色谱固定相材料［14 － 16］。在基于点击化学技术所制备的环糊精固定相中，具有代表性的主要有: Zhang 等［17］以CuSO4 /抗坏血酸钠催化体系合成了β-CD 键合手性固定相，成功分离了一些手性化合物; Wang 等［18］以CuI( PPh3) 催化叠氮基修饰的环糊精与端炔修饰的硅胶反应制备了3 种环糊精羟基不同取代的β-CD 键合手性固定相; Guo等［19］通过叠氮修饰的环糊精参与的点击反应合成了新型环糊精固定相，拓展了点击反应合成环糊精固定相途径，并在反相和亲水模式下研究了一些强极性化合物的色谱保留行为; Zhao 等［20］通过点击化学法合成了分别以四聚乙二醇、十二烷基二醇为间隔臂的β-CD 键合固定相，并考察了其在反相液相色谱模式下的分离行为。随着点击化学研究的深入，巯基-烯( thiol-ene) 这类非金属催化，没有金属残留的新型点击化学反应［21］，引起了人们的关注，并作为一种具有应用前景的点击化学反应被应用到固定相合成中。Shen 等［22］报道了通过巯基-烯点击化学法合成了一种半胱氨酸键合的两性离子亲水液相色谱固定相，并考察了该固定相在亲水模式下对极性化合物的色谱保留行为以及该固定相在亲水和反相二维色谱中的正交性。Chen 等［23， 24］应用巯基-烯点击化学法制备了用于毛细管电色谱的有机-无机
杂化硅胶整体柱。基于巯基-烯点击化学反应无需金属催化的优势，本研究采用巯基-烯点击化学法合成了环糊精键合固定相( Click TE-CD) ，并对该固定相进行表征和色谱性能考察。以极性范围较广泛的黄酮苷样品考察其在反相色谱( RPLC) 、亲水色谱( HILIC) 、超临界色谱( SFC) 等不同分离模式下的保留行为，同时研究其在各种分离模式下的正交关系。最后以含有黄酮类成分的中药样品降香提取物为实际样品，考察不同分离模式下的分离情况。