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关键词：
啤酒生产,脱氧雪腐镰刀菌烯醇,变化情况,高级醇,α-氨基氮,风味
发表时间：
2012-10-16 09:12:18
酿酒酵母中乙醇脱氢酶双水相萃取与DEAE_32层析纯化方法的比较
章蒲 | -> | 1086| 1| 0.273648MB |分析方法,酿酒酵母,乙醇脱氢酶,纯化,双水相
摘要： 比较了双水相萃取和DEAE-离子交换层析对纯化酿酒酵母中的乙醇脱氢酶的效果。实验结果表明，经(NH4)2SO4分级沉淀和DEAE-32 阴离子交换层析后，ADH 的纯化倍率为4.47 倍，回收率为32.15 %。经(NH4)2SO4分级沉淀和双水相萃取的酶液，ADH 的纯化倍率为10.69 倍，回收率为53.36 %。双水相萃取方法简单，纯化倍率和回收率优于(NH4)2SO4分级沉淀和DEAE-32 阴离子交换层析，可用于乙醇脱氢酶的纯化。
乙醇脱氢酶(ADH) 广泛存在于人和哺乳动物的肝脏、植物组织及微生物细胞中，是广泛专一性的含锌金属酶，以NAD+ 为辅酶，催化伯醇和醛之间的可逆反应[1]。乙醇脱氢酶可以作为化工生产中的优良生物催化剂， 也广泛应用于生物传感器领域[2]。
目前乙醇脱氢酶的分离和纯化多采用盐析法、色谱法、有机溶剂沉淀等方法，但是，大部分方法都包含很多的步骤，复杂、耗时，很难在大范围内应用。盐析法沉淀蛋白，是一种传统方法[3]，其方法简单，操作简便，成本很低。但是盐析后蛋白质的纯化倍率很低，所以常常要结合离子交换层析进一步纯化。离子交换层析上样量大，纯化倍率高，但是再生复杂、耗时，会导致样品稀释。双水相萃取（ATPE）根据蛋白质在两相中的分配系数不同，可以选择性地分离所需要的酶或者蛋白质，具有回收率高、易于操作、蛋白质不容易失活的特点[4]，不仅能够用于实验室纯化蛋白质，也可以用于进行大规模生产，因此，正越来越被重视。为纯化酿酒酵母中乙醇脱氢酶，笔者比较了双水相萃取和DEAE-32 阴离子交换层析法的纯化效果。
目前乙醇脱氢酶的分离和纯化多采用盐析法、色谱法、有机溶剂沉淀等方法，但是，大部分方法都包含很多的步骤，复杂、耗时，很难在大范围内应用。盐析法沉淀蛋白，是一种传统方法[3]，其方法简单，操作简便，成本很低。但是盐析后蛋白质的纯化倍率很低，所以常常要结合离子交换层析进一步纯化。离子交换层析上样量大，纯化倍率高，但是再生复杂、耗时，会导致样品稀释。双水相萃取（ATPE）根据蛋白质在两相中的分配系数不同，可以选择性地分离所需要的酶或者蛋白质，具有回收率高、易于操作、蛋白质不容易失活的特点[4]，不仅能够用于实验室纯化蛋白质，也可以用于进行大规模生产，因此，正越来越被重视。为纯化酿酒酵母中乙醇脱氢酶，笔者比较了双水相萃取和DEAE-32 阴离子交换层析法的纯化效果。
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