制备色谱操作条件的优化

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摘 要: 色谱优化是蛋白质生产制备工艺开发中必不可少的一步。本文讨论了不同的优化目标,介绍了目前常见的优化方法,特别是实际应用中的原则及实验方法,对涉及优化的基本概念也做了说明。
    目前的蛋白质色谱分离,就其应用,一般可分成实验室制备和生产制备。前者通常是为了获得一定数量的纯品,用于进一步的实验工作,如测定蛋白的物理/ 化学参数,研究其生物学、药学、毒理学性质
等。因用量不是太大,一般为了快速获得纯品,过程很少或仅做初步优化。成本在此阶段不是主要的考虑因素。
    用于生产的色谱制备与此完全不同。生产过程必须考虑成本与产率,且工艺需对上游的变动,如原料的组成波动有相当的适应,故工艺必须经过优化。由于生产管理上的要求(如GMP 等) ,条件一旦确定,很难再做变动,故优化需在过程开发阶段确定下来。
    一个特定产品的分离,往往涉及多个步骤,多种方法。方法的选定和步骤的衔接以及每步方法中条件参数的初步确立,均需以优化思想为设计指导原则[1 , 2 ] ,但本文重点不在于此。本文中的优化指在以上工作完成后,针对具体色谱工艺操作条件的优化。当然,由于联系密切,整体设计及初步实验在个别地方也稍有涉及。
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