柱后衍生_高效液相色谱法测定玉米中伏马菌素B_1和B_2

摘要：建立了邻苯二甲醛（ＯＰＡ）柱后衍生－高效液相色谱测定玉米中伏马菌素Ｂ１和Ｂ２（ＦＢ１和ＦＢ２）的方法。采用ＺＯＲＢＡＸ　ＳＢ－Ｃ１８色谱柱，以０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠溶液（ｐＨ　３．３）－甲醇为流动相，梯度洗脱。流动相流速为０．８ｍＬ／ｍｉｎ，柱温４０℃；衍生剂的流速为０．４ｍＬ／ｍｉｎ，衍生温度为室温。实验对衍生剂缓冲液的ｐＨ、衍生剂的浓度和流速、激发和发射波长等重要条件进行了优化。结果表明，衍生剂的ｐＨ 在１０．５、ＯＰＡ的质量浓度为２ｇ／Ｌ、流速为０．４ｍＬ／ｍｉｎ、激发波长３３５ｎｍ、发射波长４４０ｎｍ时测定效果良好，ＦＢ１、ＦＢ２在０．２～２０ｍｇ／Ｌ范围内线性关系良好，相关系数大于０．９９９；ＦＢ１和ＦＢ２的检出限均为０．０２ｍｇ／ｋｇ；在０．１～４．０ｍｇ／ｋｇ范围内，３个添加水平的平均回收率为８２．５％～８９．８％。该方法精确、简单、快速，适合玉米中ＦＢ１和ＦＢ２的测定。

    伏马菌素（ｆｕｍｏｎｉｓｉｎｓ）是１９８８年南非Ｇｅｌｄｅｒｂｌｏｍ等［１］发现的一组结构相似的真菌毒素，主要由串珠镰刀菌（Ｆ．ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｎｅ）、多育镰刀菌（Ｆ．ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｕｍ）产生，到目前为止已有２８种伏马菌素被分离、鉴定［２］，其中以伏马菌素Ｂ１（ＦＢ１）和伏马菌素Ｂ２（ＦＢ２）存在最广，毒性最强。伏马菌素可引起马脑白质软化症、猪的肺水肿、对老鼠的肝脏和肾脏造成伤害、诱导癌症的发生，破坏家禽的免疫系统等［３－６］。伏马菌素对人类健康的影响目前尚不清楚，但流行病学调查发现该毒素与人类食道癌、肺癌、神经管畸形的发生率存在某种相关性［７－９］。国际癌症研究机构已将伏马菌素宣布为“２Ｂ”级毒物［１０］。２００１年ＦＡＯ／ＷＨＯ（Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｎａｔｉｏｎｓ／Ｗｏｒｌｄ　ＨｅａｌｔｈＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）食品添加剂联合专家委员会第５６次会议上，临时确立了人体每日允许摄入ＦＢ１、ＦＢ２的最大限量（ｐｒｏｖｉｓｉｏｎａｌ　ｍａｘｉｍｕｍ　ｔｏｌｅｒａｂｌｅ　ｄａｉｌｙｉｎｔａｋｅ，ＰＭＴＤＩ）为２μｇ／ｋｇ［１１］，２００７年欧盟规定供人直接食用的玉米及其制品中ＦＢ１和ＦＢ２总和最高限量为１　０００μｇ／ｋｇ，用于早餐和小吃的玉米制品为８００μｇ／ｋｇ，加工的玉米制品及婴儿食品为２００μｇ／ｋｇ［１２］。我国尚未制定食品中伏马菌素的限量标准。因此，建立一种有效的检测方法开展谷物及食品中伏马菌素的监控，对于保障食品安全、制定适宜的限量标准是非常必要的。
　　伏马菌素的检测方法主要有薄层色谱法（ＴＬＣ）、气相色谱－质谱联用法（ＧＣ－ＭＳ）、酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）［１３］、液相色谱－质谱联用法（ＬＣＭＳ）［１４］ 以及高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）［１５，１６］ 等。ＨＰＬＣ方法由于操作简单，准确可靠，重复性好，是目前国际上普遍采用的伏马菌素的检测方法［１６，１７］。由于伏马菌素分子没有特定的紫外吸收，本身也不产生荧光，应用ＨＰＬＣ时需要衍生后才能进行定性、定量分析。目前ＨＰＬＣ以邻苯二甲醛（ｏ－ｐｈｔｈａｌａｌｄｅｈｙｄｅ，ＯＰＡ）柱前衍生为主［１６－１８］，操作简单，反应迅速，但ＯＰＡ 衍生产物的荧光强度随着时间延长逐渐降低，对衍生反应时间要求相对较严格，需要在衍生后２ｍｉｎ内进样［１９］；相比于柱前衍生，柱后衍生方法有效地克服了检测中荧光反应物稳定性对时间的依赖，消除了基质效应以及杂质的干扰，具有稳定性高、重现性好、操作简便、适用于大量样品的连续检测等优势［２０］。利用ＯＰＡ柱后衍生测定伏马
菌素方法虽有报道［２１］，但缺乏对衍生ｐＨ 值、衍生剂浓度、衍生剂流速等多种柱后衍生影响因素的分析和比较。本文优化了ＯＰＡ 柱后衍生的条件，建立了玉米中伏马菌素的柱后衍生－高效液相色谱方法，实现了伏马菌素的衍生反应和检测自动化控制，避免了人员操作的误差。结果表明，该方法准确、重现性好，适用于批量样品的检测分析。